Анализ крови на субпопуляции лимфоцитов

Исследование основных субпопуляций лимфоцитов – профильный анализ крови, при котором определяется уровень нескольких видов лимфоцитов, различающихся по функциям и стадиям развития. Комплекс включает в себя исследование Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-цитотоксических лимфоцитов, B-лимфоцитов, EK-клеток, T-EK-клеток, расчет иммунорегуляторного индекса, определение общего количества лимфоцитов. Анализ находит применение в иммунологии, инфекционистике, онкологии, хирургии. Показан при рецидивирующих и хронических инфекциях, состояниях иммунодефицита, аутоиммунных, аллергических и онкологических заболеваниях, при подготовке к операциям. Материалом для исследования является цельная кровь. Анализ выполняется методом проточной цитофлуориметрии. Для каждой субпопуляции лимфоцитов существуют определенные значения нормы. Подготовка результатов занимает около 2 дней.

Исследование основных субпопуляций лимфоцитов – профильный анализ крови, при котором определяется уровень нескольких видов лимфоцитов, различающихся по функциям и стадиям развития. Комплекс включает в себя исследование Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-цитотоксических лимфоцитов, B-лимфоцитов, EK-клеток, T-EK-клеток, расчет иммунорегуляторного индекса, определение общего количества лимфоцитов. Анализ находит применение в иммунологии, инфекционистике, онкологии, хирургии. Показан при рецидивирующих и хронических инфекциях, состояниях иммунодефицита, аутоиммунных, аллергических и онкологических заболеваниях, при подготовке к операциям. Материалом для исследования является цельная кровь. Анализ выполняется методом проточной цитофлуориметрии. Для каждой субпопуляции лимфоцитов существуют определенные значения нормы. Подготовка результатов занимает около 2 дней.

Основные субпопуляции лимфоцитов – группы клеток иммунной системы, различающиеся по функциям, происхождению, стадиям развития и поверхностным антигенным маркерам. Принадлежность к той или иной субпопуляции определяет роль лимфоцитов в формировании иммунного ответа, их расположение в лимфоидных органах, особенности циркуляции в кровеносной и лимфатической системе. Фенотипирование лимфоцитов необходимо для установления природы инфекционного агента, оценки состояния пациента, определения активности иммунной системы и необходимости медикаментозной терапии, контроля течения заболевания и составления прогноза.

При исследовании основных субпопуляций лимфоцитов выделяют несколько их групп. Т-лимфоциты созревают в тимусе, участвуют в клеточном иммунном ответе, регулируют функции B-лимфоцитов, ответственных за выработку антител. Т-хелперы распознают антигены и регулируют иммунный ответ через выработку цитокинов – сигнальных, информационных пептидов. Т-цитотоксические лимфоциты идентифицируют фрагмент антигена на поверхности клетки-мишени, направляют гранулы в область контакта с инфекционным агентом и запускают лизис поврежденной клетки. B-лимфоциты при контакте с антигеном делятся и дифференцируются в плазматические клетки, синтезирующие антитела. EK-клетки обладают естественной цитотоксической активностью, обеспечивают лизис поврежденных клеток-мишеней. T-EK-клетки имеют признаки Т-лимфоцитов, являются естественными неиммунными киллерами.

При выполнении комплексного исследования основных субпопуляций лимфоцитов определяется также общее количество лимфоцитов (абсолютное значение) и рассчитывается иммунорегуляторный индекс – соотношение Т-хелперов и Т-цитотоксических лимфоцитов. Для проведения анализа используется метод проточной цитофлуориметрии и иммуноферментный метод, забор крови производится из вены. Полученные результаты применяются в иммунологии, инфекционистике, ревматологии, онкологии, хирургии.

Исследование основных субпопуляций лимфоцитов используется для диагностики первичного и вторичного иммунодефицита. Вне зависимости от его типа основным и нередко единственным проявлением становятся инфекции затяжного или рецидивирующего характера. Чаще всего у пациентов определяется бактериальное поражение дыхательных путей с характерными симптомами – болью в горле, кашлем, насморком. Типичны инфекции желудочно-кишечного тракта, сопровождающиеся диареей, рвотой, синдромом мальабсорбции. Кроме этого, иммунодефицит может проявляться оппортунистическими инфекциями – цитомегаловирусной инфекцией, кандидозом, пародонтитом, конъюнктивитом, экземой, бородавками и папилломами. В более редких случаях нарушения иммунной системы сопровождаются гемолитическими патологиями (анемией, лейкопенией, тромбоцитопенией), неврологическими симптомами (судорожными припадками), онкологическими и аутоиммунными заболеваниями. Анализ на определение основных субпопуляций лимфоцитов в крови назначается пациентам при подготовке к операциям, до и после трансплантации органов, при послеоперационных осложнениях, а также для контроля лечения иммуномодуляторами и цитостатиками.

При интерпретации результатов всегда учитывается, что соотношение основных субпопуляций лимфоцитов может не отражать их реального участия в иммунологических процессах. Поэтому данное исследование дополняется анализами на иммуноглобулины, ЦИК, компоненты системы комплемента. Преимуществом фенотипирования лимфоцитов является то, что анализ позволяет более точно судить о протекании основных реакций защитной системы в отличие от теста на общее количество лимфоцитов.

Основные субпопуляции лимфоцитов исследуются в венозной крови. Процедуру забора биоматериала рекомендуется выполнять с утра, натощак. За день до исследования нужно воздержаться от употребления алкоголя, а также от тяжелых физических нагрузок. За три часа до процедуры следует отказаться от курения, избегать эмоционального напряжения. Кровь берется методом венепункции, хранится и транспортируется в пробирках с антикоагулянтом.

Исследование основных субпопуляций лимфоцитов выполняется методом проточной цитофлуориметрии, иногда – иммуноферментным методом. Проточная цитофлуориметрия основана на идентификации различных видов лимфоцитов с помощью лазера, то есть на основе характеристик светорассеяния и интенсивности луча. Иммуноферментный метод основан на том, что на поверхности лимфоцитов присутствуют различные антигены, уникальные для определенных популяций. Их обнаружение выполняется с помощью меченных ферментом моноклональных антител, количество определяется на основе изменения окраски (оптической плотности) образца. Подготовка результатов анализа занимает до 2-3 дней.

Значения нормы для анализа на основные субпопуляции лимфоцитов в крови зависят от возраста, определяются в абсолютном значении и в % от общего количества лимфоцитов:

• Т-лимфоциты: для детей до 16 лет – 1400-6450*106/л (45-81%), для взрослых – 800-2400*106/л (60-89%);
• Т-хелперы: для детей до 16 лет – 700-5116*106/л (31-64%), для взрослых – 540-1400*106/л (31-61%);
• Т-цитотоксические лимфоциты: для детей до 16 лет – 600-2490*106/л (16-38%); для взрослых – 210-1200*106/л (14-36%);
• B-лимфоциты: для детей до 16 лет – 300-1500*106/л (12-31%), для взрослых – 100-480*106/л (5-19%);
• EK-клетки: для детей до 16 лет – 100-1330*106/л (2-27%), для взрослых – 78-470*106/л (4-26%);
• EKT-клетки: для детей до 16 лет – 0-10%; для взрослых – 1-13% (абсолютное значение не определяется);
• иммунорегуляторный индекс: от 1 до 3,5.

Для детей значения нормы могут быть определены более точно согласно возрасту. Физиологическое изменение показателей анализа возможно при физической нагрузке, эмоциональном стрессе, охлаждении, после приема пищи.

Причиной повышения уровней основных субпопуляций лимфоцитов в крови является воспалительный процесс. Количество Т-лимфоцитов увеличивается при иммунном воспалении; количество Т-хелперов – при острых инфекционных, аллергических и аутоиммунных заболеваниях; количество Т-цитотоксических лимфоцитов – при острых внутриклеточных инфекциях, онкологических патологиях; количество B-лимфоцитов – при острых и хронических инфекциях, аллергиях и аутоиммунных заболеваниях; количество EK-клеток – при острых инфекциях с избытком бактериального или вирусного антигена, при онкопроцессах; количество TEK-клеток – при хронических инфекциях, длительной персистенции антигена.

Причиной снижения уровня основных субпопуляций лимфоцитов чаще всего является гипореактивность – преобладание тормозных процессов в организме на различных уровнях. Концентрация Т-лимфоцитов снижается при иммунологическом параличе – снижении или полном отсутствии иммунного ответа. Сниженный показатель Т-хелперов определяется при вторичных иммунодефицитных состояниях. Количество Т-цитотоксических лимфоцитов уменьшается при аутоиммунных и аллергических заболеваниях; количество B-лимфоцитов – при перераспределении очагов воспаления; количество EK-клеток – при высоком уровне Т-лимфоцитов. Сниженный уровень T-EK-клеток не имеет диагностического значения.

Определение основных субпопуляций лимфоцитов в крови позволяет более глубоко исследовать состояние иммунодефицита – определить тип инфекционного агента, особенности течения заболевания, необходимость применения иммуномодуляторов. Для интерпретации результатов анализа необходимо обратиться к иммунологу, инфекционисту или другому врачу, направившему на исследование. Чтобы избежать повышения показателей из-за влияния физиологических факторов, нужно соблюсти все правила подготовки к процедуре сдачи крови.

источник

Какова норма лимфоцитов в крови? Есть ли разница в их количестве у мужчин и женщин, детей и взрослых? Сейчас все расскажем. Уровень лимфоцитов в крови определяется в ходе общеклинических анализов с целью первичной диагностики наличия инфекционных заболеваний, аллергических реакций, а также при необходимости оценки побочных эффектов от лекарств и эффективности выбранного лечения.

Определение величины активированных лимфоцитов не является рутинным лабораторным исследованием и проводится исключительно при наличии показаний.

Данный анализ не выполняется отдельно от общего иммунологического обследования пациента или определения других лейкоцитарных клеток (эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов в крови и т.д.) поскольку изолировано не имеет диагностической ценности.

Лимфоциты lymph – это белые кровяные клетки (разновидность лейкоцитов), посредствам которых реализуется защитная функция организма человека от чужеродных инфекционных агентов и собственных мутантных клеток.

Лимфоциты абс – это абсолютное число данного вида клеток, определяемое по формуле:

Общее количество лейкоцитов * Содержание лимфоцитов (%)/100

Активированные лимфоциты подразделяются на 3 субпопуляции:

• Т-лимфоциты – созревают в тимусе, ответственны за реализацию клеточного типа иммунного ответа (непосредственное взаимодействие иммунных клеток с патогенами). Они подразделяются на Т-хелперы (принимают участие в антигенпрезентации клеток, степени выраженности иммунной реакции и в синтезе цитокинов) и цитотоксические Т-лимфоциты (распознают чужеродные антигены и уничтожают их за счёт выброса токсинов или внедрения перфоринов, которые повреждают целостность цитоплазматической мембраны);
• В-лимфоциты — обеспечивают гуморальный иммунитет посредством выработки специфических белковых молекул – антител;
• NK-лимфоциты (натуральные киллеры) – растворяют клетки, зараженные вирусами или подвергшиеся злокачественному перерождению.

Известно, что лимфоциты в крови способны синтезировать на своей поверхности ряд антигенов, при этом, каждый из них уникален для своей субпопуляции и этапа формирования клетки. Функциональная активность подобных клеток различна. В большинстве случаев они являются мишенью для других лейкоцитов на этапе иммунофенотипирования.

Кластер дифференциации (cluster designation) – искусственно созданная номенклатура с присвоением номера различных антигенов, которые вырабатываются на поверхности лимфоцитов в крови. Синонимы термина: CD, CD-антиген или CD-маркер.

Во время лабораторной диагностики наличие меченых клеток в общей субпопуляции белых кровяных телец определяется при помощи моноклональных (одинаковых) антител с метками (на основе флюорохрома). При взаимодействии антител со строго специфичными CD-антигенами образуется устойчивый комплекс «антиген-антитело», при этом можно произвести подсчёт оставшихся свободными антител с меткой и определить количество лимфоцитов в крови.

Выделяют 6 типов кластеров CD-антигенов:

• 3 – характерен для Т-лимфоцитов, принимает участие в образовании комплекса передачи сигнала по мембране;
• 4 – идентифицируется на нескольких типах лейкоцитов, способствует облегчению процесса распознавания чужеродных антигенов при взаимодействии с MHC (главный комплекс гистосовестимости) 2 класса;
• 8 – представлен на поверхности цитотоксичных Т-, NK-клеток, функционал аналогичен предыдущему типу кластеров, только распознаются антигены связанные с MHC 1 класса;
• 16 – присутствует на различных видах белых кровяных телец, входит в состав рецепторов, отвечающих за активацию фагоцитоза и цитотоксичного ответа;
• 19 – компонент В-лимфоцитов, необходим для их правильной дифференциации и активации;
• 56 – вырабатывается на поверхности NK- и некоторых Т-клеток, необходим для обеспечения их прикрепления к тканям, поражённых злокачественными опухолями.

Активированные лимфоциты в крови у ребёнка и взрослых определяются при:

• диагностике аутоиммунных заболеваний, онкопатологий, аллергических реакций и степени их выраженности;
• диагностике и контроле лечения острых инфекционных патологий;
• проведении дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных инфекций;
• оценке состояния иммунной системы (в том числе и при наличии иммунодефицитов);
• оценке напряжённости иммунного ответа в случае наличия тяжёлых инфекций, ставших хроническими;
• комплексном обследовании до и после обширного хирургического вмешательства;
• подозрении на угнетение иммунного статуса, вызванного генетической мутацией;
• контроле степени напряжённости иммунитета на фоне приёма иммунодепрессанов или иммуностимуляторов.

Количество лимфоцитов в крови определяется при помощи проточной цитофлуориметрии, сроки исследования 2-3 суток без учёта дня взятия биоматериала. Важно грамотно интерпретировать полученные результаты, желательно приложение к иммунограмме заключения врача-иммунолога. Окончательный диагноз устанавливается по совокупности данных лабораторных и инструментальных методов обследования, а также клинической картины пациента.

Отмечено, что диагностическая ценность значительно возрастает при оценке напряжённости иммунитета у человека в динамике при регулярных повторных анализах.

Активированные лимфоциты в анализе крови у ребенка и взрослого отличаются, поэтому при расшифровке результатов следует подбирать нормальные (референсные) значения с учётом возраста пациента.

В таблице представлены величины допустимых норм лимфоцитов (отдельных субпопуляций) в крови у детей и взрослых.

Пациенты задаются вопросом: что означает, если лимфоциты в крови выше или ниже нормы? Следует отметить, что незначительное отклонение от референсных значений может быть результатом неправильной подготовки к анализу. В этом случае рекомендуется повторить исследование.

Присутствие большого количества атипичных лимфоцитов в анализе крови у ребёнка или взрослого указывает на патологический процесс. Важно определить то, какой именно тип из общей субпопуляции белых кровяных телец отклоняется от нормы.

Повышение Т-лимфоцитов (CD3+CD19-) наблюдается на фоне лейкоза, острой или хронической стадии инфекционного процесса, гормонального сбоя, длительного употребления лекарств и биологических добавок, а также при высоких физических нагрузках и беременности. В случае снижения критерия выносится предположение о поражении печени (цирроз, рак), аутоиммунных патологиях, иммунодефицитах или угнетении иммунитета лекарственными препаратами.

Концентрация T-хелперов (CD3 + CD4 + CD45 + ) значительно повышается при интоксикации бериллием, ряде аутоиммунных заболеваний и некоторых инфекционных заражениях. Снижение величины является основным лабораторным признаком вторичного иммунодефицита, а также может наблюдаться при приёме стероидных препаратов и циррозе печени.

Причинами повышения T-цитотоксических лимфоцитов (CD3 + CD8 + CD45 + ) являются:

Отклонение от нормы в меньшую сторону указывает на угнетение естественного иммунитета человека.

B-лимфоциты (CD19 + CD3 — ) увеличиваются при сильном эмоциональном или физическом стрессе, лимфоме, аутоиммунных болезнях, а также в случае длительной интоксикации парами формальдегида. Реактивные лимфоциты В уменьшаются в случае их миграции в очаг воспалительного процесса.

Два типа натуральных киллеров: CD3 — CD56 + CD45 + и CD3 — CD16 + CD45 + достигают максимальных значений в фазе регенерации организма человека после гепатита и беременности, а также при некоторых онко-, аутоиммунных и печёночных патологиях. Их снижению способствует злоупотребление табакокурением и стероидными препаратами, а также некоторые инфекции.

Для того чтобы получить максимально достоверные результаты необходимо строго следовать правилам подготовки перед сдачей биоматериала, поскольку лимфоциты в крови чувствительны ко многим внешним факторам (стресс, лекарства). Биоматериал для исследования – сыворотка венозной крови из локтевой вены.

За 1 сутки до сдачи крови пациенту следует отказаться от употребления алкоголя и любых спиртосодержащих продуктов, а также от всех медикаментозных препаратов. В случае невозможности отмены жизненно важных средств нужно сообщить об их приёме мед. персоналу. Кроме того, исключается физическая и эмоциональная нагрузка, что может вызвать повышение исследуемых критериев.

Кровь сдаётся натощак, минимальный интервал между процедурой взятия биоматериала и последним приёмом пищи – 12 часов. За полчаса нужно отказаться от курения.

Подводя итог, следует выделить важные аспекты:

• исследование является основным компонентом при диагностике поражений иммунной системы;
• нормальные значения подбираются в соответствии с возрастом обследуемого пациента;
• точность полученных данных зависит не только от правильной реализации методики анализа, но и соблюдения всех правил подготовки самого человека;
• недопустимо отдельное применение иммунограммы для постановки окончательного диагноза, поскольку отклонение от нормы различных субпопуляций клеток иммунной системы может указывать на ряд схожих патологий. В этом случае назначается дополнительное обследование, включающее набор тестов: С3 и С4 компонента комплемента, циркулирующие иммунные комплексы, а также суммарные иммуноглобулины классов А, G и M.

Дипломированный специалист, в 2014 году закончила с отличием ФГБОУ ВО Оренбургский госудаственный университет по специальности «микробиолог». Выпускник аспирантуры ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ.

В 2015г. в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН прошла повышение квалификации по дополнительной профессиональной программе «Бактериология».

Лауреат всероссийского конкурса на лучшую научную работу в номинации «Биологические науки» 2017 года.

источник

В данном варианте исследования, помимо оценки основных субпопуляций лимфоцитов (см. Иммунологическое обследование первичное), уровня циркулирующих иммунных комплексов, основных классов иммуноглобулинов периферической крови, упор делается на расширенный анализ NK-клеток (Natural killers – «натуральные киллеры»), а также оценку активированных Т-лимфоцитов (CD3 + HLA-DR + CD45 + ) и активированных цитотоксических лимфоцитов (CD8 + HLA-DR + CD45 + ), отвечающих за противовирусный иммунитет. Анализ вышеперечисленных популяций клеток поможет понять, адекватно ли иммунная система реагирует на вирусную инфекцию и нуждается ли пациент в иммуностимулирующей терапии.

* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.

Набор тестов:

Иммунограмма, иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии.

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens.

Проточная цитометрия, иммунотурбидиметрия, ИФА..

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
• Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования.
• Полностью исключить прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием (по согласованию с врачом).
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

В современном понимании иммунный статус человека – это совокупность лабораторных показателей, характеризующих ко­личественную и функциональную активность клеток иммунной системы в данный момент времени. Оценка иммунного статуса проводится с помощью иммунологического лабораторного обследования – иммунограммы. Иммунограмма крови не отража­ет избирательно состояние патологически измененного органа или системы, но позволяет оценить иммунную систему в целом (сум­марный эффект изменения активности иммунной системы в ответ на чужеродный антиген).

Определение клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови – основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлюориметрии.

Иммунофенотипирование – это характеристика клеток, полученная при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития.

CD-антигены (англ. cluster of differentiation antigens) – это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно меченные моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии рассчитать содержание лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлюориметрии лежит фотометрическое и флюоресцентное измерение отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов –

• Т-лимфоциты (CD3 +CD19 — ),
• Т-хелперы/индукторы (CD3 +CD4 + CD45 + ),
• Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3 +CD8 + CD45 + ),
• истинные натуральные «киллеры» (NK-клетки) (CD3 —CD56 +CD45 + ),
• В-лимфоциты (CD19 +CD3 — ), –

но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

• Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток (Т-NK-клетки) (CD3 +CD56 +CD45 + ),
• NK-клетки цитолитические (CD3 —CD16 +(orhigh)CD56dimCD45 + ),
• NK-клетки цитокинпродуцирующие (CD3 —CD16 -(orlow)CD56brightCD45 + ),
• NK-клетки, экспрессирующие альфа-цепь антигена CD8 (CD3 — СD8 + CD45 + ),
• активированные В-лимфоциты (CD3 —CD25 + CD45 + ),
• активированные Т-лимфоциты (CD3 +HLA—DR + CD45 + ) и активированные цитотоксические лимфоциты (CD8 +HLA—DR + CD45 + ),
• В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3 —HLA—DR + CD45 + ),
• активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие альфа-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3 +CD25 + CD45 + ),
• регуляторные Т-хелперные клетки (CD4 +CD25brightCD127negCD45 + ), выполняющие иммуносупрессорную функцию.

Такое всестороннее изучение клеточного состава лимфоцитов в совокупности с результатами других тестов, входящих в состав исследования, позволяет установить более тонкие механизмы иммунологических нарушений. Они про­водятся для уточнения степени и глубины поражения иммунной системы и подбора препарата для проведения последующей адек­ватной иммунокорригирующей терапии, оценки эффективности проводимого лечения, определения прогноза течения заболевания.

Когда назначается исследование?

Исследование рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска с инфекционным иммунопатологическим синдромом:

• частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов: гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, вирусные пневмонии с тенденцией к рецидивированию;
• урогенитальные инфекции;
• рецидивирующий герпес различной локализации;
• гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
• длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
• генерализованные инфекции: сепсис, гнойные менингиты и т.д.

Уровень различных клеточных популяций лимфоцитов может повышаться или понижаться при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

источник

Альтернативные названия: иммунофенотипирование, иммунограмма с определением субпопуляций лейкоцитов, англ.: Immunophenotyping.

Лимфоциты являются важнейшими клетками иммунной системы, они обеспечивают нормальное функционирование всех ее звеньев – клеточного и гуморального иммунитетов. Они обеспечивают защиту организма от любых чужеродных агентов – вирусов, бактерий и других антигенов. Кроме того, они помогаю регулировать состояние собственных клеток организма, уничтожая те из них, которые способны переродится в раковые клетки.

Стандартный анализ крови с подсчетом количества лимфоцитов не позволяет получить полной информации о патологических процессах, протекающих в организме. Оценить статус иммунной системы, определить, нуждается ли она в коррекции, помогает специфический анализ – фенотипирование лимфоцитов. Суть его заключается в выделении среди множества этих клеток определенных подклассов (субпопуляций), ориентированных на узкие задачи. Осуществляется это путем выявления на поверхности лимфоцитов CD-антигенов или CD-маркеров – белковых соединений. Определяющих специализацию лимфоцитов.

• длительно текущие рецидивирующие инфекции;
• приобретенные иммунодефициты, в том числе и СПИД;
• врожденные иммунодефициты;
• всевозможные аллергии;
• заболевания аутоиммунной природы;
• обследование реципиента перед операцией трансплантации;
• обследование доноров органов для определения совместимости трансплантируемого органа;
• подготовка пациентов к обширным операциям;
• послеоперационные осложнения;
• мониторинг лечения пациентов с помощью иммуномодуляторов и иммуносупрессоров;
• мониторинг лечения онкологических пациентов.

Противопоказаний к этому исследованию нет.

Материалом для исследования служит венозная кровь. За 24 часа до взятия крови на анализ рекомендуется отказаться от приема лекарственных препаратов (только по согласованию с лечащим врачом). За 12 часов стоит воздержаться от приема пищи. Кровь берется в объеме 7-10 мл.

В бланке исследования указывается количество лимфоцитов разных фенотипических групп в абсолютных цифрах и их относительное количество (в процентах по отношению к общему числу лимфоцитов). Отмечается зависимость результатов исследования от возраста пациентов – данный факт обязательно должен учитываться при интерпретации. Значение имеют как повышение показателей, так и их снижение. Все результаты должны трактоваться в комплексе.

1. CD3+CD19- — количество увеличивается при инфекционных заболеваниях, во время беременности.
2. CD3+CD4+CD45+ (Т-хелперы) – увеличиваются при аутоиммунных заболеваниях, при гормональном дисбалансе.
3. CD3+CD8+CD45+ (цитотоксические Т-лимфоциты) – количество их повышается в острую фазу аллергических реакций, при вирусных инфекциях.
4. CD3+HLA-DR+CD45+ (Т-лимфоциты активированные) — увеличение отмечается при аутоиммунной патологии, при онкологических заболеваниях, циррозе печени.
5. CD19+CD3- (В-лимфоциты) – преобладают при стрессе, некоторых формах лимфом.
6. СD3-CD16+CD56+ (Т-киллеры) – количество их повышается после перенесенных гепатитов, при онкопатологии, аутоиммунных болезнях.
7. CD3+CD56+CD45+ (Т-естественные или нат уральные клетки) – количество их повышается при длительном существовании очага воспаления в организме, при тяжелых и затяжных воспалительных процессах (флегмоны, эмпиемы, рецидивирующие абсцессы).

К иммунограмме обязательно прилагается заключение врача-иммунолога, так как только он может правильно интерпретировать все показатели. Для лечащего врача значение имеет именно это заключение.

Данные иммунограммы должны сопоставляться с результатами других методов исследований, а также с клинической картиной патологии. Наиболее полную информацию можно получить, если проводить исследование иммунного статуса в динамике – это позволяет оценить иммунный ответ организма пациента на лечение.

Более полно оценить состояние иммунной в дополнение к фенотипированию лимфоцитов помогут анализы на компоненты системы комплемента, исследование крови на антитела и циркулирующие иммунные комплексы.

источник

Первым исследованием всегда является подсчет лейкоцитарной формулы (см. главу «Гематологические исследования»). Оцениваются как относительные, так и абсолютные значения количества клеток периферической крови.

Определение основных популяций (Т-клетки, В-клетки, натуральные киллеры) и субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперы, Т-ЦТЛ). Для первичного исследования иммунного статуса и выявления выраженных нарушений иммунной системы ВОЗ рекомендовано определение CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56, соотношение CD4/CD8. Исследование позволяет определить относительное и абсолютное количество основных популяций лимфоцитов: Т-клетки – CD3, В-клетки – CD19, натуральные киллеры (NK) – CD3- CD16++56+, субпопуляции Т лимфоцитов (Т-хелперы CD3+ CD4+, Т-цитотоксические CD3+ CD8+ и их соотношение).

Иммунофенотипирование лимфоцитов проводится c использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным ангинам на клетках иммунной системы, методом проточной лазерной цитофлуорометрии на проточных цитофлуориметрах.

Выбор зоны анализа лимфоцитов производится по дополнительному маркеру CD45, который представлен на поверхности всех лейкоцитов.

Условия взятия и хранения образцов

Венозная кровь, взятая из локтевой вены, утром, строго натощак, в вакуумную систему до указанной на пробирке метки. В качестве антикоагулянта используется К2ЭДТА. После взятия пробирку с образцом медленно переворачивают 8-10 раз для перемешивония крови с антикоагулянтом. Хранение и транспортировка строго при 18–23°С в вертикальном положении не более 24 ч.

Невыполнение этих условий приводит к некорректным результатам.

Т-лимфоциты (CD3+ клетки). Повышенное количество свидетельствует о гиперактивности иммунитета, наблюдается при острых и хронических лимфолейкозах. Увеличение относительного показателя встречается при некоторых вырусных и бактериальных инфекциях в начале заболевания, обострениях хронических заболеваний.

Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета, а именно о недостаточности клеточно-эффекторного звена иммунитета. Выявляется при воспалениях разнообразной этиологии, злокачественных новообразованиях, после травмы, операций, инфаркта, при курении, приеме цитостатиков. Повышение их числа в динамике заболевания – клинически благоприятный признак.

В-лимфоциты (CD19+ клетки) Снижение наблюдается при физиологических и врожденных гипогаммаглобулинемиях и агаммаглобулинемиях, при новообразованиях иммунной системы, лечении иммунодепрессантами, острой вирусной и хронической бактериальной инфекциях, состоянии после удаления селезенки.

Увеличение отмечается при аутоиммунных заболеваниях, хронических заболеваниях печени, циррозе, муковисцедозе, бронхиальной астме, паразитарных и грибковых инфекциях. Характерно в период реконвалесценции после перенесенных острых и хронических вирусных и бактериальных инфекций. Выраженное увеличение наблюдается при хроническом В-лимфолейкозе.

NK-лимфоциты с фенотипом CD3-CD16++56+ Натуральные киллеры (NK-клетки) – популяция больших гранулярных лимфоцитов. Они способны лизировать клетки-мишени, инфицированные вирусами и другими внутриклеточными антигенами, опухолевые клетки, а также другие клетки аллогенного и ксеногенного происхождения.

Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, в некоторых случаях отмечается при бронхиальной астме, встречается при вирусных заболеваниях, повышается при злокачественных новообразованиях и лейкозах, в периоде реконвалесценции.

Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах, паразитарных инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, облучении, лечении цитостатиками и кортикостероидами, стрессе, дефиците цинка.

Т-лимфоциты хелперы с фенотипом CD3+CD4+ Увеличение абсолютного и относительного количества наблюдается при аутоиммунных заболеваниях, может быть при аллергических реакциях, некоторых инфекционных заболеваниях. Это увеличение свидетельствует о стимуляции иммунной системы на антиген и служит подтверждением гиперреактивных синдромов.

Снижение абсолютного и относительного количества Т-клеток свидетельствует о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета, является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции; встречается при хронических заболеваниях (бронхитах, пневмониях и т.д.), солидных опухолях.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD3+ CD8+ Повышение выявляется практически при всех хронических инфекциях, вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Является характерным для ВИЧ-инфекции. Снижение наблюдается при вирусных гепатитах, герпесе, аутоиммунных заболеваниях.

Соотношение CD4+/CD8+ Исследование соотношения CD4+/CD8+ (CD3, CD4, CD8, CD4/CD8) рекомендовано только для мониторинга ВИЧ-инфекции и контроля эффективности АРВ терапии. Позволяет определить абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов, субпопуляций Т-хелперов, ЦТЛ и их соотношение.

Диапазон значений – 1,2–2,6. Снижение наблюдается при врожденных иммунодефицитах (синдром Ди-Джоржи, Незелофа, Вискотта-Олдрича), при вирусных и бактериальных инфекциях, хронических процессах, воздействии радиации и токсических химических веществ, множественной миеломе, стрессе, снижается с возрастом, при эндокринных заболеваниях, солидных опухолях. Является патогномичным признаком для ВИЧ-инфекции (менее 0,7).

Увеличение значения более 3 – при аутоиммунных заболеваниях, остром Т-лимфобластном лейкозе, тимоме, хроническом Т-лейкозе.

Изменение соотношения может быть связано с количеством хелперов и ЦТЛ у данного пациента. Например, снижение количества CD4+ Т-клеток при острой пневмонии в начале заболевания ведет к снижению индекса, а ЦТЛ при этом могут не измениться.

Для дополнительного исследования и выявления изменений иммунной системы при патологиях требующих оценки наличия острого или хронического воспалительного процесса и степени его активности, рекомендуется включать подсчет количества активированных Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+HLA-DR+ и ТNK–клеток с фенотипом CD3+CD16++56+.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+HLA-DR+ Маркер поздней активации, показатель гиперреактивности иммунитета. По экспрессии данного маркера можно судить о выраженности и силе иммунного ответа. Появляется на Т-лимфоцитах после 3-го дня острого заболевания. При благоприятном течении заболевания снижается до нормы. Увеличение экспрессии на Т-лимфоцитах может быть при многих заболеваниях, связанных с хроническим воспалением. Отмечено его повышение у пациентов с гепатитом С, пневмониями, ВИЧ-инфекцией, солидными опухолями, аутоиммунными заболеваниями.

ТNK-лимфоциты с фенотипом CD3+CD16++CD56+ Т-лимфоциты, несущие на своей поверхности маркеры CD16++ CD 56+. Эти клетки имеют свойства как Т-, так и NK-клеток. Исследование рекомендовано как дополнительный маркер при острых и хронических заболеваниях.

Снижение их в периферической крови может наблюдаться при различных органоспецифических заболеваниях и системных аутоиммунных процессах. Увеличение отмечено при воспалительных заболеваниях разной этиологии, опухолевых процессах.

Исследование ранних и поздних маркеров активации Т-лимфоцитов (CD3+CD25+, CD3-CD56+, CD95, CD8+CD38+) дополнительно назначают для оценки изменений ИС при острых и хронических заболеваниях, для диагностики, прогноза, мониторинга течения заболевания и проводимой терапии.

Т-активированные лимфоциты с фенотипом CD3+CD25+, рецeптор к ИЛ2 CD25+ – маркер ранней активации. О функциональном состоянии Т-лимфоцитов (CD3+) свидетельствует количество экспрессирующих рецепторов к ИЛ2 (CD25+). При гиперактивных синдромах количество этих клеток возрастает (острые и хронические лимфолейкозы, тимома, отторжение трансплантата), кроме того, повышение их может свидетельствовать о ранней стадии воспалительного процесса. В периферической крови их можно выявить в первые три дня болезни. Снижение числа этих клеток может наблюдаться при врожденных иммунодефицитах, аутоиммунных процессах, ВИЧ-инфекции, грибковых и бактериальных инфекциях, ионизирующей радиации, старении, отравлении тяжелыми металлами.

Т-цитотоксические лимфоциты с фенотипом CD8+CD38+ Присутствие CD38+ на ЦТЛ лимфоцитах отмечено у пациентов с разными заболеваниями. Информативный показатель при ВИЧ-инфекции, ожоговой болезни. Увеличение числа ЦТЛ с фенотипом CD8+CD38+ наблюдается при хронических воспалительных процессах, онкологических и некоторых эндокринных заболеваниях. При проведении терапии показатель снижается.

Субпопуляция натуральных киллеров с фенотипом CD3- CD56+ Молекула CD56 – адгезивная молекула, широко представленная в нервной ткани. Кроме натуральных киллеров, экспрессируется на многих типах клеток, в том число на Т-лимфоцитах.

Увеличение данного показателя свидетельствуют о расширении активности специфического клона клеток киллеров, которые имеют меньшую цитолитическую активность, чем NK-клетки с фенотипом CD3- CD16+. Количество этой популяции возрастает при гематологических опухолях (ЕК-клеточная или Т-клеточная лимфома, плазмоклеточная миелома, апластическая крупноклеточная лимфома), хронических заболеваниях, некоторых вырусных инфекциях.

Снижение отмечается при первичных иммунодефицитах, вирусных инфекциях, системных хронических заболеваниях, стрессе, лечении цитостатиками и кортикостероидами.

Рецептор CD95+ – один из рецепторов апоптоза. Апоптоз – сложный биологический процесс, необходимый для удаления из организма поврежденных, старых и инфицированных клеток. Рецептор CD95 экспрессируется на всех клетках иммунной системы. Он играет важную роль в контроле функционирования иммунной системы, так как является одним из рецепторов апоптоза. Его экспрессия на клетках определяет готовность клеток к апоптозу.

Снижение доли CD95+-лимфоцитов в крови пациентов свидетельствует о нарушении эффективности последнего этапа выбраковки дефектных и инфицированных собственных клеток, что может привести к рецидиву заболевания, хронизации патологического процесса, развитию аутоиммунных заболеваний и повышению вероятности опухолевой трансформации (к примеру, рака шейки матки при папилломотозной инфекции). Определение экспрессии CD95 имеет прогностическое значение при миело- и лимфопролифератиных заболеваниях.

Повышение интенсивности апоптоза наблюдается при вирусных заболеваниях, септических состояниях, при употреблении наркотических средств.

Активированные лимфоциты CD3+CDHLA-DR+, CD8+CD38+, CD3+CD25+, CD95. Тест отражает функциональное состояние Т-лимфоцитов и рекомендован для контроля за течением заболевания и контроля иммунотерапии при воспалительных заболеваниях разной этиологии.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 — 2019

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе Энтузиастов», «Перово»
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

источник

• Рецидивирующие инфекции, инфекционные заболевания с хроническим и затяжным течением.
• Подозрение на генетически обусловленный или приобретённый иммунодефицит.
• Аутоиммунные заболевания.
• Аллергические заболевания.
• Онкологические заболевания.
• Обследование реципиентов до и после трансплантации органов.
• Обследование пациентов перед серьёзными оперативными вмешательствами.
• Осложнённое течение послеоперационного периода.
• Контроль терапии цитостатиками, иммунодепрессантами и иммуномодуляторами.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

СD3 + (Т-лимфоциты) 1-3 мес. 55 — 78 2070 — 6540 3 мес. — 1 год 45 — 79 2280 — 6450 1 — 2 года 53 — 81 1460 — 5440 2 — 6 лет 62 — 80 1610 — 4230 6 — 16 лет 66 — 76 1400 — 2000 > 16 лет 60 — 89 880 — 2400 CD3+CD4+ (Т-хелперы) 1-3 мес. 41 — 64 1460 — 5116 3 мес. — 1 год 36 — 61 1690 — 4600 1 — 2 года 31 — 54 1020 — 3600 2 — 6 лет 35 — 51 900- 2860 6 — 16 лет 33 — 41 700 — 1100 > 16 лет 31 — 61 540 — 1460 CD3+CD8+ (Т-цитотоксические лимфоциты) 1-3 мес. 16 — 35 650 — 2450 3 мес. — 1 год 16 — 34 720 — 2490 1 — 2 года 16 — 38 570 — 2230 2 — 6 лет 22 — 38 630 — 1910 6 — 16 лет 27 — 35 600 — 900 > 16 лет 14 — 36 210 — 1200 CD19+ (В-лимфоциты) 1 мес.-2 года 19 — 31 500 — 1500 2 — 6 лет 21 — 28 700 — 1300 6 — 16 лет 12 — 22 300 — 500 > 16 лет 5 — 19 100 — 480 CD3-CD16+CD56+ (ЕК-клетки) 1 — 4 мес. 2 — 14 40 — 915 4 мес. — 1 год 2 — 13 40 — 915 1 — 2 года 3 — 16 40 — 915 2 — 6 лет 4 — 23 96 — 1330 6 — 12 лет 4 — 26 96 — 1330 12 — 16 лет 6 — 27 100 — 500 > 16 лет 4 — 26 78 — 470 CD3+CD16+CD56+ (ЕКТ-клетки) 1 мес.- 16 лет 0- 10 — >16 лет 1-13 — ИРИ (иммунорегуляторный индекс, соотношение CD3+CD4+ / CD3+CD8+ 1-3 мес 1,30- 3,50 3-12 мес 1,20-3,50 1-2 года 1,00-3,00 2-6 лет 1,00-2,10 6-16 лет 1,10-1,40 >16 лет 1,00-3,50