Меню Рубрики

Анализ крови на вгв пцр

Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке крови в норме отсутствует.
Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В.

При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1-2 недели инкубационного периода и первые 2-3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBсAg JgM или ПЦР.

Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.

Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и среднетяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и у 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный диагностический признак; он определяется при злокачественных формах гепатита В.

При остром течении гепатита В концентрация HBsAg в крови постепенно снижается вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 месяцев от начала острой инфекции.

Снижение концентрации HBsAg более чем на 50% к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев.
У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4-5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 месяцев от начала заболевания.

HBsAg может быть обнаружен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В – анти HBсAg JgM, анти- HBсAg JgG, анти HBеAg и изучают функцию печени.

При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg.
Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого пациента относят к хроническим больным вирусным гепатитом В.
Наличие HBsAg – довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн. носителей, а у нас в стране – около 10 млн. носителей.
Прекращение циркуляции HBsAg с последующей сероконверсией (образование анти-HBs) всегда свидетельствует о выздоровлении — санации организма.

Исследование крови на наличие HBsAg применяется в следующих целях:

для диагностики острого гепатита В:

  • инкубационный период;
  • острый период заболевания;
  • ранняя стадия реконвалесценции;

для диагностики хронического вирусного гепатита В;

при заболеваниях:

  • персистирующем хроническом гепатите;
  • циррозе печени;

для скрининга и выявления больных в группах риска:

  • больные с частыми гемотрансфузиями;
  • больные с хронической почечной недостаточностью;
  • больные с множественным гемодиализом;
  • больные с иммунодефицитными состояниями, в том числе СПИДом.

Результаты исследования выражаются качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBsAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBsAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В, а также при хроническом вирусном гепатите В.

В норме анти-HBcAg JgG в сыворотке отсутствует.
У больных анти-HBcAg JgG появляются в острый период вирусного гепатита В и сохраняются на протяжении всей жизни. Анти-HBcAg JgG – ведущий маркер перенесенного ВГВ.

Исследование крови на наличие анти-HBcAg JgG применяются для диагностики:

  • хронического вирусного гепатита В при наличии HBs антигена в сыворотке крови;
  • перенесенного вирусного гепатита В.
  • Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие анти-HBcAg JgG в сыворотке крови. Положительный результат – выявление анти-HBcAg JgG свидетельствует об острой инфекции, реконвалесценции или ранее перенесенном вирусном гепатите В.

    В норме HBeAg в сыворотке крови отсутствует.
    HBeAg можно обнаружить в сыворотке крови большинства больных острым вирусным гепатитом В. Он обычно исчезает в крови раньше HBs-антигена. Высокий уровень HBeAg в первые недели заболевания или обнаружение его на протяжении более 8 недель дает основание заподозрить хроническую инфекцию.

    Этот антиген часто обнаруживается при хроническом активном гепатите вирусной этиологии. Особый интерес к определению HBeAg связан с тем, что его обнаружение характеризует активную репликативную фазу инфекционного процесса . Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса.

    Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В, и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяются только при обнаружении в крови HBeAg. HBeAg – антиген – маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.

    Исследование крови на наличие HBe-антигена применяется для диагностики:

  • инкубационного периода вирусного гепатита В;
  • продромального периода вирусного гепатита В;
  • острого периода вирусного гепатита В;
  • хронического персистирующего вирусного гепатита В.
  • Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление HBeAg свидетельствует об инкубационном или остром периоде острого вирусного гепатита В или продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного.

    Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствует. Появление анти-НВeAg антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного.

    Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите анти-НВeAg обнаруживаются в крови больного вместе с НВsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-НВeAg, при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.

    Исследование крови на наличие анти-НВeAg применяются в следующих случаях при диагностике вирусного гепатита В:

  • установление начальной стадии заболевания;
  • острый период инфекции;
  • ранняя стадия реконвалесценции;
  • реконвалесценция;
  • поздняя стадия реконвалесценции.
  • диагностика недавно перенесенного вирусного гепатита В;
  • диагностика хронического персистирующего вирусного гепатита В.
  • Результат исследования выражается качественно – положительный или отрицательный. Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие антител к HBeAg в сыворотке крови. Положительный результат – выявление антител к HBeAg, которые могут свидетельствовать о начальной стадии острого вирусного гепатита В, остром периоде инфекции, ранней стадии реконвалесценции, реконвалесценции, перенесенном недавно вирусном гепатите В или персистирующем вирусном гепатите В.

    Критериями наличия хронического гепатита В являются:

  • бнаружение или периодическое выявления ДНК ВГВ в крови;
  • постоянное или периодическое повышение активности АЛТ/АСТ в крови;\
  • морфологические признаки хронического гепатита при гистологическом исследовании биоптата печени.
  • Вирус гепатита В в крови в норме отсутствует.
    Качественное определение вируса гепатита В методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания.

    Данное исследование дает полезную информацию для диагностики острого вирусного гепатита В в инкубационном и раннем периоде развития заболевания, когда основные серологические маркеры в крови у пациента могут отсутствовать. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл, прошедшей выявление ДНК пробы, специфичность – 98%.

    Этот метод имеет важное значение для диагностики и мониторинга течения хронического ВГВ. Примерно 5-10% случаев цирроза и других хронических заболеваний печени обусловлены хроническим носительством вируса гепатита В. Маркерами активности таких заболеваний является наличие HBeAg и ДНК вируса гепатита В в крови.

    Метод ПЦР позволяет определять в крови ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Определяемым фрагментом в обоих случаях служит уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В.

    Обнаружение ДНК вируса гепатита В в биоматериале с помощью ПЦР необходимо для:

  • разрешения сомнительных результатов серологических исследований;
  • выявление острой стадии заболевания по сравнению с перенесенной инфекцией или контактом;
  • контроля эффективности противовирусного лечения.
  • Исчезновение ДНК вируса гепатита В из крови – признак эффективности терапии

    Этот метод дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к активным препаратам.
    Для диагностики вирусного гепатита методом ПЦР в сыворотке крови применяются тест-системы, чувствительность которых составляет 50-100 копий в пробе, что позволяет детектировать вирус при его концентрации 5 Х 10^3 -10^4 копий/мл. ПЦР при вирусном гепатите В безусловно необходима для суждения о вирусной репликации.

    Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты.

    • Оценку уровня виремии осуществляют следующим образом:
    • менее 2.10^5 копий/мл (менее 2.10^5 МЕ/мл) – низкая виремия ;
    • от 2.10^5 копий/мл (2.10^5 МЕ/мл) до 2.10^6 копий/мл (8.10^5 МЕ/мл) – средняя виремия;
    • более 2.10^6 копий/мл – высокая виремия.

    Существует зависимость между исходом острого вирусного гепатита В и концентрацией ДНК ВГВ в крови больного. При низком уровне виремии процесс хронизации инфекции близок к нулю, при средней – хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне виремии острый вирусный гепатит В чаще всего переходит в хронический.

    Показаниями для лечения хронического ВГВ интерфероном-альфа следует считать наличие маркеров активной репликации вируса (выявление HBsAg, HBeAg и ДНК ВГВ в сыворотке крови в течение предшествующих 6 месяцев.).

    Критериями оценки эффективности лечения служат исчезновение HBeAg и ДНК ВГВ в крови, что обычно сопровождается нормализацией уровня трансаминаз и долговременной ремиссией заболевания, ДНК ВГВ исчезает из крови к 5-му месяцу лечения у 60%, к 9-му месяцу – у 80% больных. Снижение уровня виремии на 85% и более к третьему дню от начала лечения по сравнению с исходным служит быстрым и достаточно точным критерием для прогнозирования эффективности терапии.

    источник

    Гепатит В — одно из самых опасных заболеваний современности.

    Его вызывает вирус, проникающий в организм при контакте крови с инфицированным биологическим материалом, в том числе, остающимся на маникюрных принадлежностях, медицинских инструментах, машинках для нанесения татуировок, которые не были нужным образом продезинфицированы. Вирус может передаваться и при половом контакте.

    Для диагностики болезни проводится анализ на гепатит В путем забора крови пациента.

    Заражение происходит половым и бытовым путем, тип распространения — гематогенный (через кровь). При инфицировании вирус проникает в гепатоциты (клетки печени), в которых продуцируется в дальнейшем. Посредством кровотока болезнь стремительно распространяется по организму. Вирус В (HBV) характеризуется высокой устойчивостью к воздействиям температуры и кислоты, способен сохранять поражающие свойства в течение полугода.

    Если гепатит В проявил первые симптомы, прежде чем начать терапию и лечение, необходимо сдать анализы. Исследование крови является достоверным способом установки заражения гепатитом. Проводится в лабораторных условиях. Материал для анализа на гепатит В сдается натощак: с последнего приема пищи должно пройти минимум 8 часов.

    Для выявления в крови вируса гепатита В применяются анализы трех типов, характеризующих присутствие вируса в крови:

    • анализ на наличие в материале ДНК HBV путем исследования полимеразной цепной реакции;
    • качественное исследование присутствия белка Anti-HBc IgG и антигена HBsAg (встречаются у здоровых, инфицированных и переболевших);
    • анализ на выявления белков HBeAg и Anti-HBc IgM (характеризуют обострение болезни).

    Для полноты картины рекомендуется одновременно провести исследования по нескольким маркерам.

    Наиболее распространенными анализами на гепатит В является иммунологические. Их суть — выявить в крови антитела, выработанные организмом или печенью. Пробы носят качественный и количественный характер. Анализы на гепатит В и их расшифровка, как правило, содержат информацию о нескольких характерных белках. При проведении пробы исследуются следующие антитела:

    Читайте также:  Покажет анализ крови показать золотистый стафилококк

    Встречается на ранних сроках заражения до проявления клинических признаков.

    Положительный маркер говорит о присутствии вируса, но встречается и у абсолютно здоровых людей. Если в крови присутствует менее 0,05 МЕ/мл, то результат считается отрицательным. Если значение концентрации антитела выше, анализ признается положительным.

    Обнаруживается практически у каждого инфицированного пациента. Сохранения показателей на высоком уровне может говорить о переходе болезни в хроническую форму течения. Положительный маркер говорит о нахождении болезни в периоде обострения, затяжном выздоровлении. HBeAg является крайне плохим признаком. Больной очень заразен. В норме — белок в крови не обнаруживается.

    Существует два типа антител Anti-НВс: IgG и IgM. Присутствие в крови IgM является признаком течения острой формы, высокой заразности больного и возможности перерохода заболевания в хроническую форму. В норме присутствие IgM не допускается. IgG — благоприятный показатель. Маркер указывает на сформировавший иммунитет организма против гепатита В.

    При выявлении в крови маркера можно делать вывод о благоприятном течении заболевания и формировании защитного иммунитета у больного.

    Маркер сигнализирует о выздоровлении и формировании иммунитета.

    Для лабораторного обследования и выявления наличия диагноза гепатита В в крови применяют метод ПЦР. Способ рассмотрения полимеразной цепной реакции является самым современным в области выявления заболевания.

    Итоговая расшифровка показывает, имеются ли следы генного присутствия возбудителя в клетках печени.

    Если при проведении исследования соблюдаются все принципы, то результат обладает абсолютной точностью. Метод используется для постановки диагноза, применяется в процессе лечения и при противовирусной терапии.

    1. Качественное ПЦР по итогу имеет всего два значения: «обнаружено» и «не обнаружено». Процедура проводится каждому пациенту с подозрением на гепатит. При средней чувствительности теста на ПЦР в диапазоне от 10 до 500 МЕ/мл, при низких содержаниях ДНК вируса в крови, генный материал обнаружен не будет.
    2. Количественное ПЦР. В отличие от качественного, указывает не только на гепатит В. Количественный анализ указывает насколько норма здорового человека далека от показателей больного в числовом выражении. Метод позволяет оценить стадию заболевания и назначить лечение. Чувствительность теста ПЦР при количественном следовании выше, чем при качественном методе. В основе лежит подсчет выявленной ДНК, который выражается в копиях на миллилитр или МЕ/мл.

    Кроме того, количественное ПЦР дает понимание воздействия лечения и корректности подобранной терапии. В зависимости от количества генного материала вируса может быть принято решение о сокращении срока лечения или, наоборот, о его продлении и усилении.

    Метод биохимического анализа является обязательным для получения полной клинической картины течения заболевания. Этот диагностический метод дает понимание о работе внутренних органов (печени, почек, желчного пузыря, щитовидной железы и других). Расшифровка дает понимание о скорости обмена веществ в организме, возможных патологиях метаболизма. Развернутые показатели укажут на недостаток витаминов, макроэлементов и минералов, необходимых для здоровья и жизни человека.

    Сдать анализ на гепатит можно в любом другом диагностическом центре (Инвитро, Гемотест и др). Биохимический анализ крови при выявлении гепатита В включает следующие компоненты.

    Этот фермент наиболее часто встречается в повышенных концентрациях при остром и хроническом гепатите. Вещество содержится в печеночных клетках, а при поражениях органа посредством кровотока попадает в сосуды.

    Количество и концентрация в крови при вирусном заболевании постоянно меняется, поэтому исследования проводятся не реже, чем раз в квартал. АЛТ отражает не только активность вируса гепатита, но и степень вызванных им нарушений в печени. Уровень АЛТ возрастает при повышении количества токсических веществ печеночного происхождения и в присутствие вируса.

    Белок является составляющей важнейших органов человека: печени, нервной ткани, ткани почек, скелета и мышц. Фермент участвует и в построении самой главной мышцы — сердца. Высокие показатели АСТ у больного с гепатитом В может сигнализировать о фиброзе печени. Аналогичная ситуация возникает при алкогольном, медикаментозном или любом другом токсическом поражении клеток печени.

    Зашкаливающие показатели являются признаком разрушения печени на клеточном уровне. Необходимо учитывать при постановке диагноза соотношение АСТ и АЛТ (коэффициент де Ритиса). Одновременное повышение концентрации обоих ферментов — признак некроза печени.

    Вещество образуется в селезенке и печени, как результат распада гемоглобина в их тканях. Этот компонент входит в состав желчи. Выделяют две фракции белка: прямой билирубин (связанный) и непрямой билирубин (свободный). При возрастании в крови связанного билирубина имеет смысл подозревать гепатит или другие поражения печени. Это непосредственно связано с цитолизом печеночных клеток.

    Если возрастает количество непрямого билирубина, то, скорее всего, присутствует поражение паренхимотозной ткани либо синдром Жильбера. Высокий уровень билирубина по результатам анализа может стать следствием непроходимости желчных протоков. При уровне билирубина свыше 30 микромоль на литр у больного проявляется желтушный оттенок кожи, моча становится темной, а белки глаз изменяют свой цвет.

    Синтез этого белка происходит в печени. Если его количество снижено, то это свидетельствует об уменьшении синтеза ферментов в органе вследствие возникновения тяжелых поражений печеночных клеток.

    Если количество общего белка становится существенно ниже, чем принятая норма, то это говорит о замедлении функционирования печени.

    Фермент, используемый при обнаружении механической желтухи и холециститов. Возрастание уровня ГГТ является сигналом токсического поражения печени. Может провоцироваться хронических алкоголизмом и бесконтрольным употреблением медикаментов. Белок особо чувствителен к токсинам и алкоголю, под их влиянием его активность растет стремительно. Сохранение высокой концентрации ГГТ в крови в течение длительного времени говорит о тяжелых поражениях печени.

    Является продуктом белкового обмена, происходящего в печени. Резкое снижение уровня — сигнал замедления работы органа.

    Снижение уровня белковых фракций является признаком патологии печени.

    Диагностирование гепатита В представляет собой совокупное исследование показателей. Только их комплексный анализ позволяет сделать выводы об инфицировании пациента. Рассмотрим расшифровку анализа на гепатит В. Для сравнения приведена норма веществ в крови.

    Таблица. Расшифровка анализа на гепатит В.

    Наименование вещества В норме При инфицировании
    Исследования на анти-тела при гепатите В
    HBsAg Отрицательный маркер Положительный маркер (иногда обнаруживается у здоровых людей)
    HBeAg Отрицательный маркер Положительный маркер (характерен для хронического и острого состояния)
    Anti-НВс IgG Положительный (свидетельствует об формировании иммунитета к заболеванию) /отрицательный маркер Отрицательный
    Anti-НВс IgM Отрицательный маркер Положительный маркер (гепатит в стадии обострения или хронического течения, повышенная заразность)
    Anti-НВе Положительный (формирование иммунитета)/отрицательный маркер Положительный (благоприятное течение)/отрицательный маркер
    Anti-HBs Положительный (формирование иммунитета)/отрицательный маркер Положительный (благоприятное течение)/отрицательный маркер
    Метод ПЦР
    Качественное ПЦР Отрицательный Положительный
    Качественное ПЦР Отрицательный «Не обнаружено» — генный материал вируса не присутствует или его количество слишком мало;

    Менее 3,6*10^2 МЕ/мл — низкая концентрация генного материала;

    2*10^4 МЕ/мл — средняя концентрация. Лечение должно быть основано на результатах биопсии печеночных клеток;

    2*10^4 МЕ/мл — обостренное течение заболевания (обязательно применение противовирусных препаратов);

    4,8*10^7 МЕ/мл — избыточное количество ДНК вируса в крови, крайне негативный показатель, высокая степень поражения печени.

    Биохимический анализ крови
    АЛТ 6-37 МЕ/л 500-3000 МЕ/л.
    АСТ У мужчин до 40-41 МЕ/л

    У детей до 50 МЕ/л

    Свыше указанных норм
    Билирубин Непрямого — не более 17 мкмоль/л

    Всего — не более 20,5 мкмоль/л

    Свыше указанных норм
    Альбумин От 35 до 50 г/л Ниже указанной нормы
    Общий белок У взрослых от 65 до 84 г/л Свыше указанной нормы
    ГГТ У мужчин — 10-71 ед/л

    У женщин — 6-42 ед/л

    Свыше указанной нормы

    Ложноположительным называют результат, который возникает в виде положительной реакции на присутствие возбудителя вируса в крови при его отсутствии. Такой результат возможен при прохождении обследования на гепатит В и формируется под влиянием различных факторов. Встречается подобная реакция при:

    • беременности;
    • развитии онкологических заболеваний;
    • тяжелых инфекционных проявлениях;
    • перенесенной вакцинации;
    • сбоев в работе иммунной системы.

    Ложноположительный анализ на гепатит В возможен при нарушениях в ходе забора крови или во время процедуры проведения ее исследования. Анализы на гепатит В в этом случае необходимо сдать повторно. Во избежание подобного рекомендуется проходить дополнительное обследование методом ПЦР, которое без обнаружения генов гепатита В, полностью исключает заболевание.

    Дополнительная интересная информация о гепатите В – в следующем видео:

    источник

    Вирусный гепатит В успешно лечится, если его вовремя обнаружить и правильно определить количество антител и антигенов в крови больного. С помощью иммуноферментного анализа на гепатит можно обнаружить присутствие маркеров вируса, но не могут установить точно стадию процесса.

    Для количественной оценки применяют ПЦР диагностику. С помощью теста возможно посчитать количество маркеров, спрогнозировать течение болезни и вероятность излечения при помощи противовирусных препаратов.

    Главное преимущество исследования — возможность обнаружить даже минимальные концентрации вируса, идентифицировать возбудителя на видовой стадии.

    Вирус гепатита В отличается большой контагиозностью и устойчивостью к внешним воздействиям. Он сохраняет активность в следах крови больного до нескольких недель. Поэтому каждый человек подвержен риску заражения даже при условии соблюдения профилактики.

    Для диагностики заболевания назначают следующие исследования:

    Иммуноферментный анализ крови на наличие антител к ВГВ Это быстрый и информативный тест. Его недостатком является то, что исследование только дает информацию о присутствии антител, но не уточняет их количество.
    Биохимический анализ крови При начавшихся изменениях в печени в крови больного будет повышен уровень билирубина, щелочной фосфатазы и снижен уровень печеночных ферментов. Но на начальной стадии показатели будут находиться в пределах нормы.
    ПЦР (полимеразная цепная реакция) С ее помощью восстанавливают ДНК вируса, подсчитывают количественные показатели антител, уточняют стадию заболевания. То есть разное количество антител может свидетельствовать об остром этапе или о постпрививочном иммунитете.

    Американский химик К.Муллис получил Нобелевскую премию, и до сих пор применяется его метод диагностики

    Родоначальником метода ПЦР (полимеразной цепной реакции) считается ученый из Норвегии Х. Клеппе. Он первый стал проводить амплификацию (восстановление) ДНК при помощи короткой цепочки ДНК, то есть синтетического праймера (своеобразной копии).

    Однако, ученому не удалось реализовать свою идею. Похожие исследования сделал американский химик К.Муллис, который в 1993 был удостоен Нобелевской премии за свое изобретение. С тех пор ПЦР используют для установления отцовства, диагностики генетических болезней, обнаружения вирусов.

    Суть реакции в том, что при помощи ферментов копируется определенный участок ДНК. Скопировать можно только участок, который соответствует заданным параметрам и если он есть в представленном образце. Для запуска реакции применяют следующие компоненты:

    1. Матричная ДНК с участком, подлежащим копированию.
    2. Праймеры, схожие по строению участку ДНК.
    3. Полимераза, то есть фермент, запускающий реакцию. Она должна быть термостабильной, то есть выдерживать перепады температур.
    4. Раствор с определенными параметрами, обеспечивающий прохождение реакции.

    Реакция проводится в несколько этапов:

    Денатурация (прогревание) Сначала раствор нагревают, в результате чего цепочки ДНК расходятся.
    Стадия отжига Раствор остужают, праймеры связываются с одноцепочечной матрицей.
    Этап элонгации Полимераза создает дочернюю цепь ДНК, достраиваются все фрагменты цепочки. Цепочка может расти до пределов, которые задаются количеством реагентов, затем достигает состояния плато.

    Для обнаружения гепатита в применяют два типа реакции: количественную и качественную.

    Количественный метод определяет количество генома ВГВ

    Количественный ПЦР предполагает одновременное создание копий фрагментов ДНК и определение количества молекул. Измерение проводится после каждого этапа, то есть в режиме реального времени. Это достигается при помощи флюоресцентных зондов, которые включаются в цепочку молекул и светятся в определенный период исследования.

    Данный способ применяют для обнаружения фрагментов ДНК, которые являются маркерами вируса гепатита. С помощью количественного метода удается точно выделить генотип вируса. Другими словами, подсчитывают количество копий генома ВГВ на количество клеток больного.

    Количественный анализ дает ответы на следующие вопросы:

    1. С какой интенсивностью прогрессирует болезнь.
    2. Насколько эффективно проводимое лечение.
    3. Развилась ли резистентность к назначенным препаратам.

    Также количественное измерение необходимо для диагностики хронической стадии инфекции. Если количество ДНК ниже 100 шт/мл при нормальном уровне трансаминаза, то человек является носителем вируса.

    Читайте также:  Кровь на анализы при профосмотре

    При острой фазе количество антител значительно выше.При антивирусной терапии повышение количества антител свидетельствует о развившейся устойчивости к лекарствам, это является сигналом для корректировки лечения.

    Качественный ПЦР дает меньше информации, однако может исключить заражение

    Качественный ПЦР позволяет только установить присутствие возбудителя в крови. Если они отсутствуют, то пациент не заражен, при попадании возбудителя в кровь результат будет положительным.

    Однако, с помощью качественной реакции невозможно уточнить геном вируса, этап заболевания. Поэтому для диагностики ВГВ проводят как количественное, так и качественное измерение.

    Для проведения анализа методом полимеразной реакции необходима венозная кровь. Это необходимо сделать утром на голодный желудок.

    Пациенту следует правильно подготовиться к исследованию:

    1. За 10 часов отказаться от пищи, можно пить только чистую воду.
    2. Накануне прекратить прием алкоголя, за 4 часа не курить.
    3. Перед обследованием стоит избегать физических и эмоциональных стрессов.
    4. За 2 суток перестать употреблять лекарства, если это невозможно, то необходимо предупредить лаборанта. Некоторые препараты оказывают влияние на конечный результат.

    При количественной реакции оценивают полученные показатели в зависимости от числа копий ДНК

    Интерпретировать данные качественного измерения несложно. Он дает либо положительный, либо отрицательный ответ.

    При количественной реакции оценить полученные показатели можно в зависимости от числа копий ДНК. Единицей измерения является копий/мл.

    Расшифровываются данные следующим образом:

    1. Если количество ДНК ВГВ менее 90, то инфекция отсутствует. У пациента развился поствакцинальный иммунитет, либо он излечился от болезни.
    2. При числе копий 2х100 говорят о носительстве вируса.
    3. Количество 2х106 свидетельствует о хронической стадии болезни.
    4. При ДНК более 2х109 пациент болен острой стадией гепатита.

    Преимущества метода диагностики с помощью полимеразных реакцийи заключаются в следующем:

    1. Прямое обнаружение возбудителей. В отличие от него, метод ИФА дает информацию о присутствии антител к вирусу.
    2. Специфичность. То есть копируется именно участок ДНК, который имеется в образце биоматериала.
    3. Повышенная чувствительность. Метод может обнаружить даже единичные фрагменты клеток.
    4. Диагностика болезней в острой и в скрытой стадии. То есть, можно диагностировать болезнь на этапе доклинических проявлений.

    У метода есть недостатки, которые приводят к ложным результатам. Самый существенный недостаток — вероятность загрязнения материала. Основным источником загрязнения являются плохо обработанные пробирки, руки лаборанта, реактивы.

    В кровь может попасть часть ДНК от предыдущей реакции. Поэтому к лабораториям предъявляются повышенные санитарные требования: раздельные помещения, пластиковые пробирки, обработка лабораторий ультрафиолетом и т. д.

    Ложноотрицательные результаты могут быть следствием сниженной чувствительности реакции. Это происходит в следующих ситуациях:

    • пациент принимает лекарственные препараты, например, антикоагулянты;
    • человек перед анализом перенес физическое напряжение (занятия спортом, тяжелая работа);
    • заражение произошло недавно.

    Если у пациента есть высокая вероятность инфицирования, а результат исследования отрицательный, ему необходимо повторное обследование.

    Метод полимеразной цепной реакции является основным и самым информативным для диагностики ВГВ. Он позволяет не просто установить носительство инфекции, но и уточнить этап заболевания, оценить результаты лечения.

    Для более точного диагноза применяют качественное и количественное измерение. К недостаткам способа можно отнести вероятность загрязнения, снижение чувствительности и довольно высокую цену.

    Для того, чтобы результаты были наиболее достоверными, следует правильно подготовиться к исследованию и проводить его в клинике с соответствующей лицензией и хорошей репутацией.

    Смотрите видео о ПЦР:

    источник

    ИФА – иммуноферментный анализ

    HBsAg: Наличие этого антигена в крови человека говорит о том, что он инфицирован вирусом.

    • Этот антиген обнаруживается в сыворотки крови спустя 4 – 6 недель после заражения.
    • В это время признаки заболевания еще могут отсутствовать (антиген опережает симптомы примерно на месяц).
    • Антиген содержится в крови во время острого периода гепатита.
    • После выздоровления (исчезновения симптомов) этот антиген может исчезнуть из крови, но у некоторых людей сохраняется месяцы и годы.

    Aнти-HBs (HBsAb): Чаще всего анти-HBs появляются у человека спустя 3- 4 месяца после того, как у него в крови исчез антиген HBs, то есть в стадию выздоровления.
    Выявление этих антител свидетельствует о выздоровлении после острого гепатита и развитии иммунитета против вируса.

    HBcAg: Этот антиген можно обнаружить только при биопсии (взятие кусочка органа для анализа) печени. Это довольно сложная процедура (по сравнению с взятием крови), поэтому HBcAg определяется редко.

    анти-HBc (HBcAb): А вот антитела к этому антигену можно найти в крови. Появляются они еще до того, как разовьется желтуха, находятся в крови на протяжении всего острого периода болезни, циркулируют в крови продолжительное время.

    НВеAg: Этот антиген появляется в крови одновременно с HBsAg. Его обнаружение свидетельствует о высокой активности вируса. Чем больше этого антигена, тем “заразнее” человек.

    Aнти-НВе (HBeAb ): Антитела к НВе появляются после исчезновения из крови соответствующего антигена.
    Снижение содержания в крови HBeAg и появление анти-НВе свидетельствует о том, что заболевание течет доброкачественно, если ситуация обратная – это признак затяжного течения заболевания и угрозы того, что оно может перейти в хроническую форму.

    ПЦР – полимеразная цепная реакция

    ВГВ-ПЦР, или типирование ДНК – установление генетической индивидуальности любого организма на основе анализа особенностей его дезоксирибонуклеинововой кислоты (ДНК).

    Показатель активности вируса. Наиболее достоверный метод диагностики вируса гепатита В.

    ПЦР-генотипирование ВГВ.

    Молекулярная диагностика генотипический вариантов вируса гепатита В, позволяющий прогнозировать течение заболевания и эффективность терапии. В Узбекистане вывялены 5 из 9: A , B , C , D и G – генотипы. Наиболее распространенный генотипы А и D.

    Антитела, Анти-ВГС (HCV Ab) – скрининговый тест для выявления инфицированности ВГС

    Как показывает практика, определение антител является менее чувствительным в ранних стадиях заболевания и не может дифференцировать активность и ремиссию инфекции: РНК ВГС удается обнаружить на 7 – 21-й день после инфицирования ВГС, а анти-ВГС на 20 – 150-й день (в среднем 50-й день).

    Антиген ВГС (HCVcoreAg) – качественный и количественный анализ ВГС в сыворотке или плазме крови.

    Выявление самого вируса ГС по ВГС core Ag, антигенов, кодированных NS3 и NS4 зонами РНК ВГС, в ядре и цитоплазме гепатоцитов, у 60-90% больных острым и хроническим ГС; прямая корреляция между концентрацией РНК ВГС и выявлением Core Ag ВГС;

    Важное диагностическое значение при установлении связи концентрации ВГС с инфекциозностью, тяжестью заболевания и ответом на противовирусную терапию.

    РНК ВГС. Показатель репликативной активности вируса. Наиболее достоверный метод диагностики носительства вируса гепатита С. Репликативная фаза ВГС-инфекции подтверждается с помощью определения РНК вируса гепатита С в сыворотке методом полимеразной цепной реакции РНК – ВГС и обнаруживается у 65-85% лиц, имеющих антитела к ВГС.

    ПЦР-генотипирование ВГС

    Молекулярная диагностика генотипический вариантов вируса гепатита В, позволяющий прогнозировать течение заболевания и эффективность терапии. В Узбекистане вывялены 5 из 7: 1а, 1в, 2, 3а, 4 – генотипы. Наиболее распространенные в Узбекистане генотипы 1 и 3.

    Генотип вируса является крупной “таксономической” единицей и устанавливается в ходе анализа консервативных областей вирусного генома. Показано, что наиболее благоприятный прогноз течения заболевания имеют лица с невысоким титром вируса в крови и генотипом 2 или 3. Кроме того, известно, что именно с генотипом вируса связывают уровень виремии вируса в крови больного, частоту хронизации и развития таких тяжелых исходов, как гепатоцеллюлярная карцинома и цирроз печени.

    (вирус СПИДа, ВИЧ, HIV)

    Анти ВИЧ (HIV1\2 Ab) – скрининговый тест для выявления инфицированности ВГС

    Спустя три месяца после попадания вируса в кровоток, в организме человека накапливается то количество антител, которое может определить иммуноферментный анализ. Примерно в 1-5% случаев он дает ложноположительный или ложноотрицательный результаты.

    Ложноотрицательный результат может быть получен, если антитела к вирусу не успели выработаться либо на терминальной стадии СПИДа, когда вируса в крови настолько много, что клетки CD-4 и антитела почти отсутствуют. Если ты хочешь удостовериться, что твой отрицательный результат не является на самом деле ложноотрицательным, имеет смысл пересдать ИФА еще раз через 3 месяца.

    Недостаточен для постановки диагноза «ВИЧ-инфицировынный».

    Иммуноблот (ИБ) – определяет наличие специфических антител к ВИЧ. Результат может быть положительным, отрицательным и сомнительным (или неопределенным).

    Неопределенный результат может означать, что в кровотоке человека присутствует ВИЧ, но организмом выработан еще не весь спектр антител. Как правило, по прошествии 1-3-6 месяцев с момента получения сомнительного результата в сыворотке появляются одно за другим все антитела и ВИЧ. В этом случае сомнительный результат является свидетельством начальной стадии ВИЧ-инфекции. Неопределенный результат иммуноблота также может означать, что человек не инфицирован ВИЧ, но в его организме есть антитела, похожие на антитела к ВИЧ. Такой результат бывает у больных туберкулезом, онкобольных, реципиентов, получающих многократные гемотрансфузии (переливания крови), у беременных женщин. При неопределенном результате ИБ пациент находится под наблюдением врача-инфекциониста и повторяет анализ через 1, 3 и 6 месяцев.

    ПЦР-ВИЧ – используется для определения РНК и ДНК вируса. Это очень эффективная и чувствительная реакция, позволяющая получить результат, исследуя ДНК всего одной клетки путем умножения (или амплификации) специфических последовательностей ДНК. ПЦР используется для:

    • определения наличия или отсутствия самого ВИЧ в “период окна” и при неясном результате иммуноблота;
    • для определения, какой вирус присутствует в организме – ВИЧ-1 или ВИЧ-2; – для определения и контроля вирусной нагрузки;
    • для определения ВИЧ-статуса новорожденных, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей;
    • в службах переливания крови.

    Чувствительность данного теста очень высока: он обнаруживает сам вирус, причем через короткое время (в среднем около 10-ти дней) с момента предполагаемого заражения. Однако эта же высокая чувствительность позволяет тесту реагировать и на многие другие инфекции, что приводит к частым ложноположительным результатам. Поэтому по результатам этого теста никогда не ставится окончательный диагноз.

    Иммунный статус при ВИЧ

    Снижение количества CD4- клеток ниже уровня 200 в мм куб. крови.

    Критериями достаточной достоверности являются: Обнаружение суммарных антител к ВИЧ иммуноферментным или иным методом. Снижение количества CD4 ниже 400 в мм куб крови.

    К критериям средней достоверности относятся сочетанные (синдромальные) показатели системных сдвигов иммунитета, типичных для ВИЧ-инфекции. На наш взгляд, к таковым среди доступных в обычной клинике может быть отнесено уменьшение соотношения СD4/ СD8 клеток, увеличение количества СD8 клеток. Среди малодоступных в обычной практике показателей можно упомянуть повышенные уровни сывороточного бета-2-микроглобина, неоптерина.

    К критериям относительной достоверности можно отнести обнаружение отдельных лабораторных сдвигов, достаточно типичных для ВИЧ-инфекции, но неспецифичных, таких как лимфоцитопения повышение уровня кислотолабильного интерферона.

    источник

    ДНК-содержащий вирус семейства Hepadnaviridae является прямым возбудителем гепатита В. Анализ ПЦР на гепатит B, позволяет определить в крови пациента наличие инфицированного ДНК-вируса. Результат положительного типа на ДНК HBV демонстрирует наличие в крови пациента инфекции. Стоит отметить, что диагностика посредством использования ПЦР-анализа позволяет не только определить наличие инфекции, но и его количественную нагрузку и активность. Этот метод является надежным, точным и воспроизводимым. Количественная оценка ДНК HBV с помощью qPCR может использоваться для контроля эффективности терапии HBV и быть полезной для понимания естественной истории HBV в эндемической области.

    Процесс заражения гепатитом В происходит бытовым или половым путем – через непосредственный контакт с зараженной кровью. После инфицирования, вирус попадает в клетки печени, в которых и продолжает свое активное размножение. Через кровоток патогенные клетки распространяются по всему организму. Стоит отметить, что клетки гепатита В обладают высокой устойчивостью к воздействию кислоты и высокой температуры. Он способен в течение полугода сохранять свои поражающие свойства.

    На сегодняшний день различают две разновидности диагностики, которые назначают при подозрении на наличие вируса гепатита В: качественный ПЦР (позволяет определить со стопроцентной точностью наличие вируса в крови) и количественный ПЦР (позволяет определить степень активности вируса).

    Качественный ПЦР назначается в том случае, если есть подозрение на заражение ВГВ, или в случае, если иные методы диагностики не дали понятного результата. Данную разновидность ПЦР-анализа расшифровывать предельно просто: отрицательный (вирус в крови не обнаружен), положительный (вирус в крови обнаружен). Основная задача качественного анализа – определение наличия инфицированных клеток на ранних стадиях заболевания. Если вирус был диагностирован через две недели после предположительного инфицирования, эффективность лечения будет на порядок выше. В случае, если вирус в крови находится порядка двух месяцев, заболевание приобретает хроническую форму, следовательно, не подлежит полному излечению.

    Читайте также:  Анализ крови у кормящей женщины

    Если качественная диагностика подтвердила присутствие в крови ВГВ, доктор назначает количественный анализ.

    Количественный анализ позволяет определить активность развития вируса в организме пациента. Данная разновидность ПЦР-анализа назначается:

    • для определения стадии заболевания;
    • для наблюдения за эффективностью применяемой терапии;
    • для определения уровня устойчивости вируса к тому или иному препарату;
    • для подбора лекарственных препаратов.

    Количественные показатели вируса в крови измеряются в МЕ на миллилитр или ДНК на миллилитр.

    В случае, если доктор назначает сразу количественную диагностику, не проверив качественную, то за норму считаются показатели 75 МЕ на миллилитр. Если обнаружено меньшее количество международных единиц, результат – ВГВ не обнаружен, когда показатели превышают норму, диагностируется наличие вирусного гепатита В.

    Нормой ПРЦ при гепатите В считаются следующие показатели (в копий/миллилитр): меньше 10 3 – вирус неактивный; от 10 4 до 10 5 – вирус обычно неактивен; 10 6 – вирус активный; 10 7 – вирус в высокой стадии активности.

    Отталкиваясь от количественных показателей можно определить со стопроцентной точностью форму заболевания (носительство, острая или хроническая), реакцию вируса на лечение, необходимость проведения дополнительных диагностик.

    Хроническая форма гепатита В устанавливается в том случае, если активность вируса составляет 10 5 копий на миллилитр. Носительство диагностируется, если количественные показатели ниже 10 5 копий на миллилитр.

    В период лечения необходимо регулярно (раз в три месяца) проходить повторную количественную диагностику, для того, чтобы вовремя рассмотреть период, когда вирус выработает иммунитет к используемым препаратам и сменить методику. В случае, если все исследования проведены правильно и подобрано эффективное лечение, на повторном анализе (через трое суток лечения) будет наблюдаться снижение активности патогенных клеток как минимум на восемьдесят пять процентов.

    Биопсия печени проводится только в том случае, когда за шесть месяцев лечения показатели АЛТ превышают норму в два раза, ва ПЦР-диагностика демонстрирует показатели ниже 10 5 копий на миллилитр крови.

    Для анализа необходима венозная кровь. Для того, чтобы получить максимально точные результаты, необходимо подготовиться к процедуре: отказаться от приема еды как минимум за восемь часов до забора крови; за двое суток отказаться от медикаментозного лечения (в обязательном порядке предупредить доктора о приеме препаратов); перед сдачей крови нужно провести двадцать минут в режиме отдыха; за двенадцать часов до процедуры отказаться от спортивных упражнений, спиртных напитков, курения и употребления жирной пищи.

    Важно: если диагностика необходима ребенку до пятимесячного возраста, то ему нужно за шестьдесят минут до процедуры забора крови давать по стакану кипяченой воды каждые десять минут.

    Анализ ПЦР на гепатит В сегодня является максимально точной методикой диагностирования вируса. Метод позволяет определить мутировавшие и скрытые формы заболевания, диагностировать заболевание в первые дни инфицирования, следовательно, подобрать максимально эффективное лечение. Лаборант сравнивает полученные результаты анализа с нормой, а затем вносит их в заключение. Данные обрабатываются в течение двух недель. Для того, чтобы получить направление на прохождение ПЦР-анализа, необходимо обратиться к гепатологу, инфекционисту или вирусологу. Важно помнить, чем быстрее вы попадете к врачу, тем быстрее будут получены результаты, следовательно, тем эффективнее будет лечение.

    источник

    Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.

    ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:

    • при возникновении признаков гепатита В у пациента;
    • во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
    • для уточнения эффективности терапии.

    Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.

    Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.

    Непривычная утомляемость

    • нарастающая усталость при небольших нагрузках;
    • непривычная утомляемость;
    • тяжесть в области правого подреберья;
    • пониженный аппетит, тошнота;
    • желтушность кожных покровов, склер глаз;
    • светлый кал;
    • тёмная моча;
    • болезненные ощущения в суставах.

    Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.

    Показаниями к ПЦР являются:

    • положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
    • острый и хронический гепатит;
    • микст-гепатиты;
    • количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
    • разработка тактики эффективной терапии.

    Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.

    Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:

    • полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
    • воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
    • 15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
    • прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
    • детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.

    В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.

    Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.

    Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.

    Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:

    • Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
    • Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
    • Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
    • Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.

    Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»

    Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.

    В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.

    Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.

    Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.

    Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:

    • конкретную вирусную нагрузку на печень;
    • интенсивность прогрессирования заболевания;
    • устойчивость к препаратам противовирусной группы;
    • результативность лечения.

    Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.

    Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.

    Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса

    Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.

    Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:

    • количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
    • сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
    • маркеров вирусной инфекции;
    • результатов биопсии печени.

    Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:

    • обнаружить носители вируса;
    • прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
    • убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
    • мониторить активность вируса на всех фазах развития;
    • выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
    • оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.

    В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:

    Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью

    1. Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
    2. Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
    3. Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
    4. Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
    5. Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
    6. Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.

    Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.

    Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.

    источник