Меню Рубрики

Приготовление реактивов для анализа крови

Тема 3.12 ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА И РЕАКТИВЫ ДЛЯ МЕДИЦИНСКИХ, БИОХИМИЧЕСКИХ И КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЙ

Состояние и перспективы развития аналитической и клиникодиагностической лабораторных служб.

  1. Химические реактивы: характеристика, ассортимент.
  2. Биохимические реактивы, характеристика.
  3. Диагностические средства.
    1. Иммунобиологические диагностические средства.
    2. Контрастные диагностические средства.
  4. Ветеринарные препараты.
  1. Состояние и перспективы развития аналитической и клиникодиагностической лабораторных служб

Контроль качества ЛС является основной составной частью процесса обеспечения населения и ЛПУ высококачественными товарами. Этому вопросу придается самое серьезное значение во всем мире, т. к. речь идет о жизни и здоровье миллионов людей.
Под качеством ЛС понимается соответствие их по физикохимическим, химическим, биологическим и визуальным характеристикам стандарту, разработанному и утвержденному на момент регистрации препарата.
В настоящее время утвержден и действует приказ М3 РФ №21^ от 16.07.97 «О контроле качества ЛС, приготовляемых в аптеках», регламентирующий контроль качества ЛС.

Этот документ направлен на то, чтобы уровень требований к качеству JIC соответствовал принятой ВОЗ «Системе удостоверения качества фармацевтических препаратов в международной торговле» и отвечал международным правилам GMP.
В состав контрольно-разрешительной системы входят: Государственный фармакологический комитет, Государственный фармакопейный комитет, Комитет по новой медицинской технике и изделиям медицинского назначения, ГосНИИ по стандартизации и контролю JIC и ряд других НИИ, осуществляющих контрольноиспытательную работу, а также около 100 территориальных КАЛ или центров по контролю качества лекарств.
Для контроля качества ЛС необходимы реактивы, индикаторы, титрованные растворы, специальное оборудование и лабораторная посуда, чем оснащается аналитическая служба в фармацевтических организациях.
Клиникодиагностическая лабораторная служба функционирует при лечебных учреждениях или же иногда самостоятельно в виде клиникодиагностических центров.
Сравнительно недавно — в начале XX века — врач в своей деятельности при установлении диагноза и лечении больных руководствовался только показаниями своих органов чувств и такими инструментами, как стетоскоп, термометр, неврологический молоточек, ртутный манометр. В дореволюционной России лабораторной службы как таковой не было. Постепенно с появлением отечественных микроскопов, устройств для приготовления гистологических препаратов, термостатов, сушильных шкафов, лабораторной и мермой посуды стали усложняться лабораторные анализы, позволяющие детально анализировать кровь, мочу и другие биологические жидкости.
Научный прогресс позволил в настоящее время регистрировать и анализировать разные процессы в организме человека на любой стадии заболевания. Созданы приборы, аппараты, разработаны методы анализов, с помощью которых диагностика стала дифференцированной и сложной. Кроме того, биохимические анализы способствуют оптимальному подбору лекарственной терапии и своевременной ее коррекции.
Создание совершенной автоматизированной лабораторной техники позволяет не только диагностировать заболевание, но и моделировать физиологические и патологические явления, т.е. прогнозировать исход заболевания. На современном этапе в клиникодиагностической службе применяются электронно-оптические микроскопы, спектрофотометрия, ультразвук, радиоизотопы, лазерные установки.

  1. Химические реактивы: характеристика, ассортимент

К числу веществ, предназначенных для аналитической службы, относят химические реактивы, титрованные растворы, индикаторы, индикаторную бумагу, растворители.
Реактивы химические — это химические препараты высокой или относительно высокой чистоты, предназначенные для анализа, научно-исследовательских или иных лабораторных работ.
При помощи химических реактивов можно установить какие химические процессы проходят при хранении веществ, что дает возможность решать вопросы стабилизации, разрабатывать науч- но-обоснованные условия хранения.
Термин «реактив» и «реагент» обычно считаются синонимами.
В зависимости от степени чистоты выделяют следующие категории реактивов:

  1. Особой чистоты (сверхвысокой очистки), предназначаются, как правило, для применения в ядерной технологии, радиоэлектронике и т.п.
  2. Химические чистые «Х.Ч.».
  3. Чистые для анализа «Ч.Д.А.».
  4. Чистые «Ч».
  5. Очищенные «Очищ.»
  6. Технические продукты, расфасованные в мелкую тару «Техн».

Чистота реактивов различных категорий регламентируется
ГОСТами и техническими условиями, номера которых указыва- « ются в маркировке.
Классификация химических реактивов представлена на рис. 91.

Рис. 91. Классификация химических реактивов.

  1. Соли неорганических соединений (алюминия, аммония, бария, висмута, железа, калия, кальция, натрия и др.).
  2. Окислители:
  • аммония персульфат,
  • бромная вода,
  • раствор калия бихромата,
  • раствор калия йодата,
  • раствор калия перманганата,
  • раствор перекиси водорода,
  • хлорная вода.
  1. Органические соединения (агар, ацетон, бензин, глицерин, камфора, крезол и др.).
  2. Кислоты и щелочи (азотная, борная, лимонная, салициловая, серная и др.).
  3. Радиоактивные реактивы, содержащие изотопы: Н2, С14, N15, О17, О18 и др.

Упаковка реактивов должна обеспечивать удобное пользование препаратом и предохранять его от загрязнения и порчи (склянки-капельницы, гранулы, таблетки, ампулы и др.). При хранении радиоактивных реактивов необходимо соблюдать специальные правила.
Многие реактивы являются ядовитыми, огнеопасными, поэтому при работе с ними необходимо также соблюдать специальные предосторожности.
Титрованные растворы — это растворы точно известной концентрации, предназначенные для целей объемного анализа.
Концентрация титрованного раствора выражается молярнос- тью, титром или титром по определенному веществу. Для изготовления титрованных растворов применяются вещества «Х.Ч.».
Основной ассортимент титрованных растворов для аптеки включает: растворы аммония роданида, йода, калия бромата, калия перманганата, едкого натра, серебра нитрата, натрия нитрата, тиосульфата, трилона Б, кислоты хлористоводородной и др.
Хранят титрованные растворы при комнатной температуре, при необходимости защищая от воздействия углекислоты, влаги воздуха и от прямых солнечных лучей.
Индикаторы — это химические вещества, которые при тит- риметрических методах анализа позволяют обнаруживать, что к титруемому веществу прибавлено эквивалентное количество тит- ранта.
Обнаружение изменений определяется визуально или инструментальным методом.
Классификация индикаторов:

  • кислотно-основные для водных и неводных сред,
  • металлохромные (применяются в комплексонометрии),
  • адсорбционные (осадкообразующие),

  • окислительно-восстановительные.

Основной ассортимент индикаторов для аптеки: бромфеноло- вый синий, железоаммониевые квасцы, калия хромат, метиленовые: красный, оранжевый, синий; фенолфталеин и др.
Хранятся индикаторы в защищенном от света месте, в банках или флаконах оранжевого стекла.
Индикаторная бумага предназначается для определения pH водных растворов и суспензий. Ее ассортимент включает: РИФАН, ФАН, красную и синюю лакмусовые, куркумовую, конго, фенолфталеиновую, йодокрахмальную.
Растворители предназначаются для растворения веществ при проведении химического анализа. Ассортимент: ацетон, хлороформ, глицерин, спирт, эфир.

  1. Биохимические реактивы, характеристика

Биохимические реактивы предназначены для определения изменений химического состава и обмена веществ в организме человека в динамике течения патологического состояния, диаг- ностики и их лечения.
С помощью биохимических реактивов определяются в биологических жидкостях (кровь, моча, слюна, желудочный сок, спинномозговая жидкость, желчь, сперма и др.) различные вещества, для показателей которых установлены нормы или границы. В зависимости от величины отклонений от них можно диагностировать большинство заболеваний.
С этой целью используются различные биохимические реактивы, позволяющие определять: белок, эритроциты, гемоглобин, лейкоциты, глюкозу, кетоновые тела, нитриты, билирубин и др. показатели.
В биохимическом анализе широко применяется электрофорез, различные виды хроматографии, многочисленные физические, главным образом, оптические методы: фотометрия, флюорометрия, спек- трофотометрия, масс-спектрометрия, ЯМР, также полярография, радиоиммунный и иммуноферментный анализ и др.
Важным направлением клинической диагностики является переход к экспресс-диагностике, что значительно ускоряет процесс лечения.
С большим успехом в качестве биохимических реактивов для этого используются тест-полоски, которые в отличие от других методов исследования не требуют использования дополнительно специальной аппаратуры.
В последнее десятилетие широко распространяются иммунологические методы исследования. Это диагностические методы, осно

ванные на специфическом воздействии антигенов и антител. Они применяются для лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней, определения групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений и т. д. Иммуноферментный анализ (ИФА) основан на использовании антител, конъюгированных с ферментами. Наиболее популярной разновидностью ИФА является иммуносорбция, суть которой заключается в следующем: на специальном планшете в лунки помещается антиген, затем добавляются сыворотка крови, меченая ферментом антисыворотка (ферментзависи- мые метки) и субстрат. Результаты определяются по изменению цвета жидкой среды. ИФА отличается экологической чистотой, высокой специфичностью, точностью и воспроизводимостью.

  1. Диагностические средства

Современный ассортимент диагностических средств весьма обширен, т.к. постоянно разрабатываются новые методы диагностики или модифицируются уже известные, проверенные временем методы. Классификация диагностических средств представлена на рис. 92.

Рис. 92. Классификация диагностических средств.

    1. Иммунобиологические диагностические средства

Диагностика иммунобиологическая — это иммунологические методы для диагностики различных патологических состояний, определения иммунологической реактивности организма, совместимости тканей донора и реципиентов и т. д.

— —г ¦¦ =
Для диагностики применяют различные серологические реакции, кожные пробы, биохимические тесты и т. д.
Аллергены — это вещества, вызывающие аллергические реакции у человека или животных. В медицине применяются для диагностики гиперсенсибилизации организма на те или иные вещества-аллергены. Препараты-аллергены выпускаются в виде растворов для инъекций или подкожных инъекций в ампулах или флаконах. В ассортименте аллергенов около 120 наименований

  • это вытяжки из растений (пыльца), насекомых, грибов, молока, домашней пыли, куриных яиц, мяса, рыбы, шерсти животных, кишечной палочки и ряда бактерий (стрептококка, стафилококка и др.) и т.п.

Антитела — это белки глобулиновой природы, образующиеся в организме в ответ на введение веществ, несущих на себе признаки генетически чужеродной информации. Выпускаются в виде лио- филизированного порошка в ампулах или флаконах. Ассортимент содержит 13 наименований, среди которых антитела диагностические и моноклональные.
Диагностикумы представляют собой сухие лиофилизированные порошки или жидкие суспензии в ампулах и флаконах, есть и наборы диагностические многокомпонентные. Ассортимент включает свыше 130 наименований. Диагностикумы позволяют определить ботулизм, геморрагическую лихорадку, энцефалит, бруцеллез, оспу, холеру, чуму и другие заболевания.
Иммуноглобулины —¦ это группа белков, глобулинов сыворотки крови, обладающая свойствами антител. У человека выделено 5 классов иммуноглобулинов IgA, IgG, IgM, IgD, IgE.
Иммуноглобулины представляют собой порошки лиофилизированные для инъекций или инфузий, растворы для инъекций. Ассортимент иммуноглобулинов составляет свыше 100 наименований, среди которых иммуноглобулины: человеческий, нормальный, аденовирусный, антилимфоцитарный, антирабический, антирезус, антистафилококковый, против гепатита В человека, клещевого энцефалита, лихорадки Эбола и др. Хранятся при температуре 2-10° С в защищенном от света месте, срок годности 1-2 года.
Микротесты (микрометоды) — это микротест-системы для биохимической идентификации и определения чувствительности различных бактерий и вирусов. Ассортимент около 20 наименований. Выпускаются отдельные тест-системы для ИФА или в виде многокомпонентных диагностических наборов-систем. Совместное русско-швейцарское предприятие «ДИАплюс» выпускает большой набор тест-систем, предназначенных для диагностики беременности, заболеваний щитовидной железы, нарушений функций генеративных (половых) органов, злокачественных заболеваний,

различных инфекционных заболеваний, в т.ч. вирусного гепатита, ВИЧ-инфекции.
Также выпускаются различными фирмами тест-системы для ИФА на диагностику развития плода, аутоиммунных заболеваний (иммунный статус), аллергических заболеваний, герпеса, заболеваний ЖКТ, крови, токсоплазмоза, цитомегалии, детских болезней: краснухи, кори, паротита, ветряной оспы; венерических заболеваний: хламидиоза, сифилиса.
Большей частью реактивы для ИФА выпускаются наборами, например, «ДИА плюс» 35 наборов.
Для контроля за наступлением беременности в аптечных учреждениях появились одноразовые тесты:
Би-шур-С — тест одноразовый на определение беременности по ХГЧ (хорионическому гонадотропину человека). Может быть использован в домашних условиях, время реакции мочи 1-5 мин. Выпускается фирмой Ситрон Биоресерч (США).
ХГЧ-ИХА-Вера — полоски для иммунохроматографического определения хорионического гонадотропина в моче для ранней диагностики беременности. В упаковке 100 шт. (Россия).
Сыворотки представляют собой жидкую фазу крови, формирующуюся после ретракции кровяного сгустка. Они имеют большое количество неорганических и органических соединений, в т.ч. белка.
Применяются для судебно-медицинских целей, а также диагностических для отдельных заболеваний (бруцеллез, сифилис, грипп, менингит, оспа, дифтерия и др.). Выпускается в виде жидкости, суспензии, порошка лиофилизированного, в ампулах, флаконах, бутылках; есть и многокомпонентные наборы. Ассортимент составляет около 110 наименований, хранятся при температуре 2-8° С, срок годности 1 -2 года.
К другим диагностическим иммунобиологическим средствам относятся антигены, белки, гидролизаты, питательные среды, реагенты, ассортимент которых по сравнению с вышеприведенными значительно меньше. В отличие от JIC ассортимент диагностику- мов практически весь отечественный;
В числе производителей диагностических иммунобиологических средств следующие российские предприятия:

  • Предприятие по производству бактерийных препаратов НИИ ЭМ им. Н.Ф. Гамалеи;
  • Предприятие по производству бакпрепаратов им. Г.И. Габричевского;
  • Биомед им. И.И. Мечникова;
  • НПО Питательные среды;
  • Екатеринбургское предприятие по производству бакпрепаратов;
  • С.Петербургский НИИ ВС;
  • Нижегородский НИИ ЭМ;
  • Аллерген;
  • Вибрион;
  • Ланафарм;
  • Экотем;
  • НПО Диагностические системы и др.
    1. Контрастные диагностические средства

В настоящее время диагностика различных заболеваний внутренних органов осуществляется с применением рентгенографии, метода ядерно магнитного резонанса, ультразвуковых исследований. Для исследования применяют контрастные средства, подразделяющиеся на 2 группы:

  1. рентгенонегативные, пропускающие рентгеновские лучи;
  2. рентгенопозитивные, задерживающие лучи.

К первой группе относятся диоксид углерода, азот, кислород, ксенон и др. газы; ко второй — йодозамещенные (на основе три- йодбензола) и не содержащие йод вещества, которые носят название ренттеноконтрастные вещества. Они применяются внутрь или парентерально, а затем проводятся рентгеноскопия или другие радиологические методы исследования различных органов.
Рентгеноконтрастные средства подразделяются на 2 группы, в том числе:

  1. ионные контрастные средства (имеют некоторые недостатки: вызывают боль в сосудах, чувство жара, аллергоподобные реакции и др. осложнения);
  2. неионные контрастные средства (лучше переносятся пациентами, отличаются меньшей химической токсичностью).

Натрия амидотризоат (МНН) — ионное контрастное средство, применяется для рентгенологических исследований сосудов,- сердца, в урологии и гинекологии. Выпускается р-р для инъекций в ампулах и флаконах. Сп. Б. Хранится в защищенном от света месте. Триомбраст (Украина), Триомбрин (Россия), Тразограф (Индия), Урографин (Германия; содержит помимо натриевой соли еще и метилглюкамин амидотризоат).
Йодамид (МНН) — по свойствам и применению аналогичен натрию амидотризоату. Выпускается p-jgt; для инъекций и для инфузий. Сп. Б. Йодамид 24% (Италия), Йодамид 300 для инъекций (Россия, Италия), Йодамид 380 для инъекций (Россия, Украина).
Йопромцд (МНН) — применяется при компьютерной томографии различных органов (сосудов, ЖКТ, в гинекологии, урологии и др.). Сп. Б. Выпускается р-р для инъекций. Ультравист 240, 300, 370 (Германия).

Читайте также:  Общий анализ крови при хроническом панкреатите

Йогексол (МНН) — неионное средство, р-р для инъекций во флаконах Омнипак (Ирландия, Норвегия).
Бария сульфат — применяется при рентгенографии ЖКТ, выпускается порошок для приготовления суспензии оральной (Россия). Адсобар (Россия), Корибар-Д (Россия).
Вазографин — применяется при рентгенографии сердечно-сосудистой системы, в урологии; выпускается р-р для инъекций (Россия).
Адипиодон (МНН) — для рентгенологических исследований желчных путей и желчного пузыря; р-р для инъекций. Сп. Б. Би- лигност (Россия).
Гадопентеновая кислота (МНН) — контрастное средство для магнитно-резонансной томографии головы и спинномозгового канала, р-р для инъекций. Сп. Б. Магневист (Германия).
Радиофармацевтические контрастные препараты — это вещества, меченные радиоактивными изотопами, применяются для проведения различных радиологических исследований.
Железа цитрат, меченный железом-59 — раствор во флаконах, (Россия).
Золота — 198 коллоидного раствор для внутривенных инъекций

  • во флаконах (Россия), Комизол, Золото 198 (Россия).

Кукурузное масло, меченное йодом-131 (Россия).
Церетек — порошок лиофилизированный для инфузий (Великобритания).
Разные контрастные средства
Индигокармин — р-р для инъекций в ампулах (Россия).
Флюоресцеин натрия — р-р для инъекций, Флюоресцит (США).
Пентагастрин (МНН) — применяется для диагностических исследований ЖКТ, выпускается р-р для инъекций. Сп. Б. (Россия).

  1. Ветеринарные препараты

В последние годы в связи с расширением перечня товаров, реализуемых в аптечных учреждениях, препараты для животных могут быть включены в ассортимент аптек. Необходимость в таких средствах обусловлена тесными контактами человека и животных, проявляющимися не только в содержании в домашних условиях последних, но и в потреблении человеком продуктов питания животного происхождения.
В настоящее время в ветеринарной практике и животноводстве применяется свыше 2 тыс. наименований лекарственных препаратов, позволяющих бороться с заболеваниями животных, а также проводить различные профилактические мероприятия против вирусных и бактериальных инфекций.

Все ветеринарные препараты проходят апробацию и контроль качества, для чего имеются соответствующие нормативные документы.
Современный ассортимент ветеринарных препаратов включает ряд групп, представленных на рис. 93.

Рис. 93. Классификация ветеринарных препаратов.

Вакцины. Ассортимент вакцин включает средства против различных заболеваний для крупного рогатого скота, свиней, кроликов, лошадей.
Сыворотки предназначены для профилактики, лептоспироза, эшерихиоза, паратифа, рожи.
Биопрепараты включают биостимуляторы из тканей животных для внутреннего и наружного применения, а также противовирусные препараты для животных и птиц (Фоспренил).
Антипаразитарные средства включают препараты против блох, клещей, глистов разных видов, чесотки и других возбудителей заболеваний (Неостомозан, Бутокс, Альбен, Пиперазин, Универм, Авер- сект, Ивомек и др.).
В ассортимент антибактериальных входят препараты антибиотики, применяющиеся и для людей, в том числе Левомицитин, Амоксициллин, Гентамицин, Бензилленициллин, Бициллин, Неомицин, Тетрациклин, Стрептомицин и др._ В ветеринарии используются Метро- нццазол, Диоксвдин, Ихтиол, Йод, Стрептоцид, Фуразолидон и др. антибактериальные препараты.
В группу химиотерапевтических включены некоторые препараты для лечения животных, например Глюкоза, Кальция хлорид, Кофеин, Новокаин как растворитель, Окситоцин, Ферроглюкин и др.
Витамины также широко представлены в ассортименте: есть препараты жирорастворимых витаминов А, Д, Е (тривитамины),

рыбий жир, комплексы витаминов группы В (комплекс В), мука костная как источник микроэлементов.
Большой ассортимент представлен витамино-минеральных подкормок (премиксов), например, Айболит, Борька для свиней, Буренка

  • дойных коров, Гаврюша — телят, Гнедой — лошадей, Иван Иваныч — гусей, Пушок — пушных зверей, Рябушка — кур, Ушастик — кроликов и нутрий, Щенок — щенков и др.

Для домашних собак и кошек имеются моющие зоошампуни с инсектицидным действием (Шампунь деликс, Шампунь луговой).
Вопросы для самоконтроля

  1. Дайте определение термина «качество ЛС».
  2. Какой приказ М3 регламентирует контроль качества ЛС в аптеках?
  3. Расскажите состав контрольно-разрешительной системы.
  4. Дайте характеристику химических реактивов.
  5. Какие титрованные растворы и индикаторы применяются в аптечных учреждениях?
  6. Для чего предназначены биохимические реактивы?
  7. Дайте классификацию диагностических средств.
  8. Дайте характеристику иммунобиологических диагностических средств.
  9. Расскажите о контрастных диагностических средствах.
  10. Дайте характеристику ветеринарных препаратов.

источник

Подготовка рабочего места и реактивов.

Для каждой методики должно быть подготовлено рабочее место, на котором собраны нужные реактивы и посуда. Пипетки устанавливают в пробирках, которые стоят в штативах. На каждой пробирке (или гнезде штатива) делают надпись, для какого реактива или операции пипетка предназначается. На флаконы с реактивами наклеивают этикетки с названиями реактивов и датами приготовления. Когда реактивы готовы, приступают к анализу калибровочных проб, по данным которых строят калибровочный график. Если он получился линейным и результаты воспроизводимы, можно переходить к исследованию биологического материала. Лучше всего пронумеровать гнезда в штативе и работать так, чтобы анализ пробы с определенным номером всегда выполнялся в одном и том же гнезде. Для этого все образцы биологического материала, поступившие в лабораторию за день, нумеруют подряд и в дальнейшем всю работу выполняют под номерами. Подавляющее большинство анализов можно с равным успехом проводить как в пробирках, так и в пенициллиновых флакончиках, однако флакончики удобнее, так как могут стоять на столе без штатива и легко закрываются пробками.

Наиболее широко распространена обработка стеклянной посуды хромовой смесью. Хромовая смесь – очень едкий реактив, поэтому также используется сода, мыло и стиральный порошок. Каждый способ мытья посуды имеет свои преимущества и недостатки. Хромовая смесь обеспечивает степень чистоты, достаточную практически для всех видов анализов, но способ трудоемок и требует соблюдения мер предосторожности. Стиральные порошки безопаснее и работать с ними проще, но они прочно адсорбируются на стекле и могут быть удалены только при многократном промывании посуды водой.

Приготовление реактивов и проверка их чистоты. Важно!

Приготовление реактива начинается с взвешивания. Надо готовить такое его количество, которое может быть израсходовано за 1-2 месяца, но в то же время навеска не должна быть менее 20-30 мг, так как иначе точное взвешивание осложняется. При приготовлении калибровочных растворов в прописях обычно указывают круглые числа, например 100 мг или 0,2 ммоля, которые должны быть растворены в 50 или 100 мл растворителя. Растворы обычно отмеривают с помощью мерной посуды – мерных колб и цилиндров, но иногда бывает удобно взвесить растворитель на весах, особенно если нужно отмерить большие и некруглые количества.

3% раствор – в 100 г раствора содержится 3 г данного вещества и 97 г других составных частей – «процентные растворы».

Вода : спирт : ацетон 1 : 2 : 3 – данная смесь получена путем смешивания 1 объема воды, 2 объемов спирта и 3 объемов ацетона – «объемные проценты».

Растворы с точными концентрациями, особенно калибровочные и буферные, надо готовить в мерных колбах; мерные цилиндры можно использовать только при отсутствии высоких требований к точности.

Отмеривание растворов, взвешивание центрифугирование.

Для отмеривания растворов применяют пипетки различных конструкций и дозаторы. Наиболее перспективны автоматические пипетки со сменными наконечниками для фиксированных или изменяемых объемов. Сухие вещества для приготовления реактивов взвешивают на аналитических, аптечных или технических весах. Лабораторные центрифуги могут иметь два типа роторов – угловые и с подвесными стаканчиками. В угловом роторе граница осадка идем косо, что затрудняет отсасывание жидкости. В роторе с подвесными стаканчиками осадок ложится точно на дно пробирки, и его граница строго перпендикулярна длинной оси, и если осадок неплотный, то вследствие толчков при остановке центрифуги может образоваться муть.

Дата добавления: 2015-07-13 ; Просмотров: 1760 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Все объявления

низкотемпературные морозильники с температурным режимом -24С, -55С, -85С

Адрес и телефон· www.winecoolers.ru

1. Барбитуровая кислота (раствор в пиридине).В колбу вносят 3 гбарбитуровой кислоты, прибавляют 15 мл свежеперегнанногопиридинаи 3 мл концентрированнойсоляной кислоты. Содержимое колбы хорошо взбалтывают, прибавляютводудо 50 мл и фильтруют. Этот реактив должен быть свежеприготовленным.

2. Баритовая вода.5 ггидроксида бариявзбалтывают со 100 мл свеже-прокипяченной, а затем охлажденнойдистиллированной воды. Этотраствордолжен быть свежеприготовленным.

3. Бромная вода.Этот реактив представляет собой насыщенныйрастворбромавводе. В склянку с притертой пробкой вносят 3 гбромаи 100 млводы. Смесь интенсивно взбалтывают и оставляют на несколько часов для разделения слоевжидкостей. Верхний прозрачный слойжидкостисливают в склянку из оранжевого стекла с притертой пробкой. Реактив сохраняют в защищенном от света месте.

4. Бумага иодкрахмальная.Небольшое количество рисового иликартофельного крахмалатщательно перемешивают с небольшим количествомводы. Полученнуюсуспензиюмалыми порциями вливают в кипящуюводу, перемешивают стекляннойпалочкойи продолжают кипятить до получения прозрачногораствора. К охлажденномурастворукрахмалаприбавляют немного чистогоиодида калия. Этимрастворомпропитывают полоскифильтровальной бумаги, которые затем высушивают.

5. Бумага, пропитанная ацетатом свинца.К 5%-мурастворуацетата свинцаприбавляют 5%-йрастворгидроксида натриядорастворенияобразующегося осадка. В полученныйрастворна 1—2 мин погружают полоскифильтровальной бумаги, которые затем высушивают навоздухе.

6. Бумага, пропитанная бензидином.Приготовляютраствор, содержащий 0,286 гацетата медив 100 млводы(раствор А), и насыщенныйрастворацетатабензидина. К 47,5 мл насыщенногораствораацетатабензидинаприбавляют 52,5 млводы(раствор Б). Затем смешивают равные объемырастворовА и Б. В этойжидкостисмачивают полоскифильтровальной бумаги, которые высушивают навоздухе.

7. Бумага, пропитанная раствором бромида или хлорида ртути (II).Нарезанные кусочкифильтровальной бумагипропитывают 5%-м спиртовымрастворомбромида илихлоридартути(II). Затем этубумагувысушивают при комнатнойтемпературе(в вытяжном шкафу) и сохраняют в скляике с притертой пробкой в темном прохладном месте.Бумагуможно применять в качестве реактива не более одного месяца со дня приготовления.

8. Вата, пропитанная раствором ацетата свинца.К 10 г основногоацетата свинцаприбавляют 100 млводы, а затем по каплям прибавляютуксусную кислотудо получения прозрачного или слегка опалесцирующегораствора. Этимрастворомсмачивают гигроскопическуювату, которую высушивают навоздухе. Высушеннуюватусохраняют в склянке с притертой пробкой.

9. Гидроксостибиат калия (раствор).В 100 мл горячейводырастворяют 2,2 г гидроксостибиатакалия. Полученныйрастворкипятят в течение 2 мии. После охлаждения крастворуприбавляют 3,5 мл 6 н.растворагидроксида калия.Жидкостьоставляют на сутки, а затем фильтруют.

10. Гипохлорит натрия.Для приготовлениягипохлорита натрияописано несколько способов:

а) в ступкувносят 20 гхлорной извести, прибавляют 100 мл холоднойводыи хорошо смешивают, затем прибавляют 500 мл 5%-горастворакарбоната натрия.Жидкостьхорошо перемешивают и оставляют на некоторое время. Прозрачнуюжидкостьсливают с осадка и фильтруют.

б) через 5%-й растворгидроксида натрияпропускают газообразныйхлордо насыщенияраствораэтимгазом.

11. Дииодокупрат калия(враствореиода). В 3 млводырастворяют 0,3 гсульфата меди, прибавляют 1 мл концентрированнойсоляной кислотыи 3 гиодида калия.Жидкостьвзбалтывают и прибавляютводудо 10 мл. Через сутки с осадка сливаютжидкостьи применяют ее в качестве реактива, представляющего собой смесьраствораиодаи дииодокупратакалия(K[CuI2]).

12. Дитизон(раствор вхлороформеили в четыреххлористом углероде).Дитизон(дифенилтиокарбазон) представляет собойкристаллыв виде топкихиглсине-черного цвета с фиолетовым оттенком. Вводеон практически нерастворим. Легко растворяется в органическихрастворителях. Врастворахдитизонпроявляет способность к кето-енольнойтаутомерии.

Товарный дитизонможет содержать примеси дифенилтиокарбадиазона (продуктокислениядитизона), дитизонатов некоторыхметаллови другихвеществ. Окраска этих примесей мешает обнаружениюионовметалловс помощьюдитизона. Поэтому перед приготовлениемрастворадитнзона его подвергают очистке.

В 150 мл хлороформаиличетыреххлористого углеродарастворяют 0,2 гдитизонаи через 5—10 мин фильтруют. Фильтрат собирают в делительную воронку вместимостью 500 мл, прибавляют 50 мл 3 н.раствора аммиакаи взбалтывают. При этом водный слой, содержащий аммонийнуюсольдитизона, приобретает желтую или оранжевую окраску, а хлороформный слой, в котором содержится дифенилтиокарбадиазон,— коричневую или красно-бурую окраску. Затем от хлороформного слоя отделяют водную фазу и взбалтывают ее с новыми порциямихлороформадо тех пор, пока водный слой не будет иметь неизменяющуюся желтую окраску. После этого отделяют водную фазу и к ней (при охлаждении льдом) прибавляют 2—3 гаскорбиновой кислотыи 4 н.растворсерной кислотыдо рН = 3. 4. Выделившийся при этомдитизониз водной фазы несколько раз экстрагируютхлороформом(по 15 мл). Экстракциюдитизонановыми порциямихлороформапроводят до тех пор, пока последняя хлороформная вытяжка не перестанет окрашиваться в зеленый цвет. После этого хлороформные вытяжки соединяют и доводят иххлороформомдо 200 мл. Этотраствор, содержащий 0,1 %дитизона, имеет зеленую окраску. Его сохраняют в холодном месте в склянке из темного стекла. На поверхность хлороформногорастворадитизонананосят слой 0,2 н.растворасерной кислотытолщиной 0,5 см.

13. Дихромат калия(раствор). К 0,37 гдихромата калияприбавляют 15 млводы. Послерастворениядихромата калияосторожно прибавляют 28 мл концентрированнойсерной кислоты.Растворохлаждают и прибавляютводудо 65 мл.

14. Диэтилдитиокарбамат свинца(раствор в хлороформе). К 0,5 гацетата свинцаприбавляютводудо егорастворения. К полученномурастворуприбавляют 25 мл 10 %-горастворанитрата калия. Смесь этихрастворовпереносят в делительную воронку и прибавляют 50 мл 1 %-горастворадиэтилдитиокарбаматааммония(или натрия). Содержимое делительной воронки несколько раз взбалтывают с новыми порциямихлороформа(по 50 мл) до тех пор, пока осадок не растворится и не перейдет полностью из водной фазы в хлороформный слой. Полученные при этом хлороформные вытяжки соединяют, доводятхлороформомдо 250 мл, фильтруют и применяют в качестве реактива.

15. Диэтилдитиокарбамат серебра(раствор в пиридине). В 200 млводырастворяют 3 г диэтилдитиокарбаматанатрия. К этомурастворуприбавляют 50 мл 7 %-горастворанитрата серебра. Выпавший желтый осадок отфильтровывают через воронку Бюхнера и высушивают между листамифильтровальной бумаги. Из этого осадка приготовляют 0,5 %-йрастворвпиридине. Полученныйрастворгоден к употреблению 10 сут. Его сохраняют в прохладном месте в склянке из темного стекла.

16. Иодид калия(раствор всерной кислотеи этиловом спирте). К 3 гиодида калияприбавляют 1 мл концентрированнойсерной кислоты, 5 млэтилового спирта(96°) и 8 млводы.

17. Иодидмеди(I) (суспензия). В 100 млводырастворяют 21,2 гиодида калия. К этомурастворуприбавляют 100 мл 16 %-горастворасульфата меди(II). Образовавшийся осадокиодидамеди(I) отстаивают, а затем осторожно сливаютжидкость. Осадок несколько раз взбалтывают сводой, затем с 2 н.растворомсульфата натрияи снова сводой. Осадок, отмытый отиода, промывают насыщеннымрастворомсульфата натриядлякоагуляциичастичек этого осадка.Жидкостьс осадка переносят на бумажный фильтр. Осадок на фильтре промываютводой, а затем переносят в цилиндр, прибавляют 100 млводыи взбалтывают. Полученную таким образомсуспензиюиодидамеди(I) сохраняют в склянке из темного стекла.

Читайте также:  Показания анализа крови при аллергии

18. Иод сублимированный.В фарфоровойступкерастирают 1 гиодида калия, 2 гоксида кальцияи 6 гиода. Смесь переносят в тонкостенныйстакани помещают его на песочную баню.Стаканнакрывают часовым стеклом, наливают на него небольшое количествоводы, а затем нагревают. При этомиодвозгоняется и оседает на охлажденномводойстекле в виде игольчатыхкристаллов. Сублимированныйиодхранят в эксикаторе надхлоридом кальция. Шлиф эксикатора не следует смазыватьвазелином.

19. Иод дважды сублимированный. В фарфоровойступкетщательно растирают 1 гиодида калия, 2 гоксида кальцияи 6 гиода, очищенного путем однократнойсублимации. Смесь переносят в тонкостенныйстакан, помещают его на песочную баню и проводятсублимацию, как указано выше (см.иодсублимированный). Дважды сублимированныйиодхранят в эксикаторе надхлоридом кальция. Шлиф эксикатора не следует смазыватьвазелином.

20. Кобальтинитрит натрия(раствор). В 50 млводырастворяют 23 гнитрита натрия. К этомурастворуприбавляют 3 гнитрата кобальта(III), 20 мл 5 н.растворауксусной кислоты, а затемводудо 100 мл. Полученныйраствороставляют на сутки, затем фильтруют. Реактив используют свежеприготовленным.

21. Метиловый фиолетовый(раствор). В 400 млводырастворяют 0,5 гметилового фиолетового, прибавляют 5 мл концентрированнойсоляной кислоты, 12,1 гсульфата натрияи еще 5 мл концентрированнойсоляной кислоты.Жидкостьоставляют на 8 ч, затем прибавляют 5 гактивированного угля, хорошо взбалтывают и фильтруют. Фильтрат разбавляютводойдо 500 мл. Этот реактив пригоден к употреблению в течение двух месяцев после приготовления.

22. α-Нафтол(раствор). В 40 %-мэтиловом спиртерастворяют 0,05 г α-нафтола, а затем объемжидкостидоводят тем жеспиртомдо 100 мл.

23. β-Нафтол(раствор). В 40 мл 10 %-горастворагидроксида натриярастворяют 2 г β-нафтола и прибавляютводудо 100 мл. Этотраствориспользуют свежеприготовленным.

24. Нильский голубой(спиртовой раствор). Нильский голубой относится ккрасителям оксазиновогоряда. Спиртовой 0,1 %-йрастворнильского голубого применяется в качествеиндикатора, синяя окраска которого при рН= 10,1. 11,1 переходит в красную. Близкий интервал перехода окраска имеет ализариновый желтый Р, желтая окраска которого при рН= 10,1. 12,1 переходит в лиловую.

25. Нитрат висмута(раствор). К 0,43 г нитратависмутаприбавляют 30 мл ледянойуксусной кислотыи взбалтывают. К полученномурастворуприбавляютводудо 150 мл.

26. Нитрат меди (аммиачный раствор). В небольшом объемеводырастворяют 1 гнитрата меди(I) и 4 г гидрохлорида гидроксиламииа, прибавляют 5 мл 20 %-гораствора аммиака.Жидкостьвзбалтывают до обесцвечивания, а затем прибавляютводудо 50 мл.

27. Пиридин свежеперегнанный.В товарномпиридинемогут быть примеси, мешающие обнаружению и количественному определению рядавеществ

с помощью этого реактива. Для очистки пиридинаот примесей применяется несколько способов. Приводим один из них.Пиридинв течение суток настаивают с грануламигидроксида калия. После этогопиридинсливают в высушенную колбуаппаратадляперегонкижидкостей. В эту колбу прибавляютоксид барияи отгоняютпиридинна глицериновой бане. Отогнанныйпиридинсохраняют в склянках с притертой пробкой.

Другие способы получения очищенного свежеперегнанного пиридинаподробно описаны в ряде источников (см. например, А. Губен-Вейль. Методыорганической химии: В 2-х т.—М.:Химия, 1967.—Т. 2. 1032 с).

28. Пиридии-родаиидный реактив.Этот реактив представляет собой смесь равных объемов 50 %-го водногорастворапиридинаи 20 %-го водногорастворароданидааммония.

29. Реактив Бушарда.В 10—15 млводырастворяют 2 гиодида калия. К полученномурастворуприбавляют 1,27 гиода. Послерастворенияиодаприбавляютводудо 100 мл.

30. Реактив Вагиера.В 10—15 млводырастворяют 2 гиодида калия. К этомурастворуприбавляют 1 гиода. Послерастворенияиодаприбавляютводудо 50 мл.

31. Реактив Грисса.Для получения этого реактива приготовляют 2раствора: 1 %-йрастворсульфаниловой кислоты в 30 %-мраствореуксусной кислоты(раствор А) и 0,1 %-йрастворα-нафтиламина в 30 %-мраствореуксусной кислоты(раствор Б). Перед употреблением смешивают равные объемырастворовА и Б. Реактив применяется для обнаружения нитритов.

32. Реактив Драгеидорфа.В 20 млазотной кислоты(пл. 1,18) растворяют 8 госновного нитрата висмута. Полученныйрастворвливают враствор, содержащий 27,2 гиодида калияв 30 млводы. Через несколько днейжидкостьфильтруют и разбавляютводойдо 100 мл.

33. Реактив Драгендорфа, модифицированный по Муиье.В 10 мл ледянойуксусной кислотырастворяют 0,85 госновного нитрата висмутаи прибавляют 40 млводы. К этойжидкостиприбавляютраствор, содержащий 8 гиодида калияв 20 млводы. Перед употреблениемберут1 мл указанногораствора, прибавляют к нему 2 мл ледянойуксусной кислотыи 10 млводы.

34. Реактив Зоннеишейиа.Крастворумоногидрофосфатанатрияприбавляютраствормолибдата аммониявазотной кислоте. Образовавшийся осадок отфильтровывают и растворяют в небольшом объемерастворакарбоната натрия.Растворвыпаривают досуха, сухой остаток прокаливают, а затем охлаждают. К остатку прибавляют десятикратное количествоводыиазотную кислотудорастворенияосадка.

35. Реактив Майера. К 1,35 гхлоридартути(II) прибавляют 20 мл 25 %-гораствораиодида калия. Послерастворенияхлоридартутиприбавляютводудо 100 мл.

36. Реактив Марки.К 1 мл концентрированнойсерной кислотыприбавляют каплюформалинаи охлаждают. Этот реактив используют свежеприготовленным.

37. Реактив Маиделина.К 0,01 гванадатааммонияприбавляют 2 мл концентрированнойсерной кислоты. Реактив должен быть свежеприготовленным.

38. Реактив Марме.В горячемрастворе, содержащем 10 гиодида калияв 30 млводы, растворяют 5 гиодида кадмия. Полученныйрастворсмешивают с равным объемом насыщенногораствораиодида калия.

39. Реактив Миллона.Этот реактив представляет собой смесь нитратов одно- и двухвалентнойртути, которая содержит примесьазотистой кислоты. Описано несколько способов приготовления реактива Миллона:

а) 10 г нитрата ртути(I) растворяют в 8,5 мл концентрированнойазотной кислоты. Полученныйрастворразбавляют двойным объемомводы;

б) 10 г металлической ртутирастворяют в 15 мл концентрированной азотной кнслогы и прибавляют 30 млводы. Прозрачныйрастворсливают и применяют в качестве реактива.

40. Реактив Несслера.В 50 млводырастворяют 50 гиодида калия. К этомурастворупри постоянномперемешиванииприбавляют насыщенныйрастворхлоридартути(II) (6 гхлоридартути(II) в 100 мл воды) до появления устойчивого осадкаиодидартути. Затем прибавляют 200 мл 6 н. ра-

створа гидроксида калияиводудо 500 мл. Реактив сохраняют в темном месте.

41. Реактив Триидлера.4 гхлоридартути(II) при нагревании растворяют в 85 млводы,растворохлаждают, прибавляют 12 мл 1 н.растворасоляной кислотыи 4 гнитрата железа(III). Послерастворениянитрата железаобъемжидкостидоводятводойдо 100 мл.

42. Реактив Фелинга:а) 34,66 г перекристаллизованногосульфата медирастворяют вводе, подкисленной 2—3 каплями разбавленнойсерной кислоты, и прибавляютводудо 500 мл (раствор А). Затем к 173 г сегнетовойсолиприбавляют 50 ггидроксида натрияи растворяют в 400 млводы. Этотраствордоводятводойдо 500 мл (раствор Б). Перед употреблением смешивают равные объемырастворовА и Б;

б) 7 г сульфата медирастворяют в 100 млводы. К этомурастворуприбавляютраствор, содержащий 14 ггидроксида натрияи 36 г сегнетовойсолив 100 млводы.

43. Реактив Фолина — Чиокальто.К 100 гвольфрамата натрияприбавляютводудорастворения(раствор А). К 25 гмолибдата натриятакже прибавляютиодудорастворения(раствор Б).РастворыА и Б смешивают и прибавляютводудо 700 мл. Этужидкостьпереносят в колбу вместимостью 1500 мл, в которую прибавляют 50 мл 85 %-горастворафосфорной кислотыи 100 мл концентрированнойсоляной кислоты. Колбу закрывают пробкой, снабженной обратным холодильником, а затем содержимое колбы беспрерывно кипятят в течение 10 ч. После указанного временижидкостьохлаждают, прибавляют 150 гсульфата лития, 50 млдистиллированной водыи 3—5 капельброма.Жидкостьв колбе кипятят без холодильника в течение 15 мин (для удаления избытка брома). После охлажденияжидкостиее переносят в колбу и добавляютводудо 1000 мл.Растворхорошо взбалтывают и фильтруют. Фильтрат собирают в склянку из темного стекла с притертой пробкой. Реактив сохраняют в холодном месте. Он пригоден к употреблению в течение нескольких месяцев. Перед употреблением реактив разбавляютводой(1:3).

44. Реактив Форреста.Смешивают 25 мл 0,2 %-горастворадихромата калияс 25 мл 30 %-горастворасерной кислоты, прибавляют 25 мл 20 %-горастворахлорной кислотыНClО4и 25 мл 50 %-гораствораазотной кислоты.

45. Реактив ФПН.К 5 мл 5 %-горастворахлорида железа(III) прибавляют 45 мл 20 %-горастворахлорной кислотыи 50 мл 50 %-гораствораазотной кислоты.

46. Реактив Фреде.К растертому впорошокмолибдату аммония(или натрия) прибавляют концентрированнуюсерную кислоту. Смесь интенсивно взбалтывают. Полученный насыщенныйраствормолибденовой кислотыв концентрированнойсерной кислотесливают с осадка. Реактив используют свежеприготовленным. При стоянии реактив может изменять свою окраску.

47. Реактив Шейблера.К 20 мл 25 %-горастворавольфрамата натрияприбавляют 10 мл 25 %-горастворафосфорной кислотыи хорошо перемешивают.

48. Реактив Эрдмана.К 20 мл концентрированнойсерной кислотыприбавляют 10 капель 15 %-йазотной кислотыи взбалтывают.

49. Роданид кобальта (раствор).Смешивают 1 гнитрата кобальта(II) и 4 гроданидакалия. Смесь этихвеществрастворяют в 20 млводы.

50. Сернистая кислота (раствор).Сернистая кислотаявляется малоустойчивой. Ее приготовляют непосредственно перед употреблением. С этой целью через холоднуюводупропускают тококсидасеры(IV), который получают в специальномаппаратепри взаимодействиисерной кислотыссульфитом натрия. Полученныйрастворв 5—10 раз разбавляютводойи применяют в качестве реактива.

51. Соль Мора (раствор).К 0,1 гсолиМора прибавляют 0,5 мл 25 %-горастворасоляной кислоты, а затемводудо 100 мл. К 5 мл полученногораствораприбавляют 4 гхлорида аммонияиводудо 100 мл.

52. Сульфаииловая кислота диазотироваииая.В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 5 млрастворасульфаниловой кислоты (4,5 г сульфаниловой кислоты и 45 мл концентрированнойсоляной кислотыв 500 мл воды).

Колбу охлаждают льдом и прибавляют 2,5 мл 10 %-го растворанитрита натрия. Смесь оставляют на льду на 5 мин, затем прибавляют еще 10 мл 10 %-горастворанитрита натрия, взбалтывают, оставляют на льду в течение 5 мин и объемрастворадоводятводойдо метки.

53. Сульфат меди(раствор ваммиакеи пиридине). К 10 мл 3 %-горастворасульфата медипо каплям прибавляют 25%-йраствор аммиакадо полногорастворенияобразующегося осадка. После этого прибавляют еще несколько капель 3 %-горастворасульфата медидо получения нерастворимого осадка, к которому по каплям прибавляют свежеперегнанныйпиридиндорастворенияосадка. К полученномурастворуеще прибавляютпиридиниз расчета 5—8 капель на каждые 10 млраствора.

54. Сульфат ртути (раствор).К 5 гоксида ртутиприбавляют 10 мл концентрированнойсерной кислотыи 100 млводы. Послерастворенияоксида ртутиобъемжидкостидоводятводойдо 250 мл.

55. Тетрароданомеркуроат (II) аммония.Смешивают 5 гхлоридартути(II) и 5 гроданидааммония. Полученную смесь растворяют в 60 млводы.

56. Фуксинсернистая кислота (раствор): а) 0,2 г химически чистого основногофуксинарастворяют в 120 мл горячейводы. После охлаждениярастворак нему прибавляют 6 г безводногосульфита натрия, растворенного в 20 млводы, н 4 млсоляной кислоты(пл. 1,18). Затемжидкостьдоводятводойдо 200 мл и фильтруют. Профильтрованнуюжидкостьпереносят в склянку из темного стекла с притертой пробкой. Реактив должен быть бесцветным или слабожелтоватого цвета;

б) через 0,1 % растворфуксинапропускают тококсидасеры(IV) до обесцвечиванияжидкости.

57. Хлорид железа (III)(раствор, содержащийиодидкалия). К 3 мл 10 %-горастворахлорида железа(III) прибавляют 1 мл концентрированнойсоляной кислотыи 3 гиодида калия, а затем прибавляютводудо Ю мл. Через сутки реактив сливают с осадка и сохраняют в склянке из темного стекла.

58. Хлорид олова (II)(раствор). К 5,65 гхлоридаолова (II) прибавляют 2 мл концентрированнойсоляной кислоты(пл. 1,18) и нагревают на водяной бане (80 °С) дорастворениясоли.Растворохлаждают и прибавляютводудо 100 мл.

59. Хлорная вода.Реактив представляет собой насыщенныйрастворхлоравводе. Хлорнуюводуполучают пропусканием токахлорачерезводу. Склянки наполняют хлорнойводойпочти доверху и сохраняют в прохладном, защищенном от света месте.

60. Хлорцинкиод.Растворяют 2 гхлорида цинкав 10 млводы(раствор А). В другой склянке растворяют 2,1 гиодида калияв 5 млводы. В полученнойжидкостирастворяют 0,1 г дважды сублимированногоиода(раствор Б). КрастворуА прибавляют по каплям приперемешиваниирастворБ. К смесирастворовА и Б прибавляют несколькокристалловдважды сублимированногоиода. Через сутки прозрачнуюжидкостьпереносят в склянку из оранжевого стекла.

61. Цинк «купрированный».Цинк, не содержащиймышьяка, хорошо промываютводойи высушивают навоздухе. Затем на несколько секунд (до потемнения) его опускают в 0,05 %-йрастворсульфата меди. После этогоцинкпромываютводойи высушивают навоздухе.

62. Цинк-уранилацетат (раствор).К 55 млводыприбавляют 10 гацетатауранила, 30 гацетата цинкаи 9 мл 6 н.растворауксусной кислоты. Эту смесь нагревают дорастворенияреактива, а затем прибавляютводудо 100 мл. Через 24 часа полученныйрастворфильтруют и применяют его в качестве реактива.

63. Аммиакат серебра(водно-ацетоновый раствор). 0,5 гнитрата серебрарастворяют в 5 млдистиллированной воды. К этомурастворуприбавляют 5 мл концентрированногоаммиака, а затем объемжидкостидоводятацетономдо 100 мл.

64. Аммиачная буферная смесь.Растворяют 10 гхлорида аммонияв 50 мл 25 %-гораствора аммиака.

65. Бромид натрия(раствор, содержащийхлоридмеди). К 4 гбромида натрияприбавляют 0,1 гхлорида медии 5,9 млводы.

66. Бромфеноловый синий(раствор, содержащий нитрат серебра). К 10 мл 0,5 %-горастворабромфенолового синего вацетонеприбавляют 90 мл 0,5 %-горастворанитрата серебрав смесиводыиацетона(1:3). Полученныйрастворсохраняют в темном месте. Он пригоден к употреблению в течение 15 сут после приготовления.

67. Дитизонат этилмеркурхлорида(хлороформный раствор). В делительную воронку вносят 10 мл 0,05 %-го хлороформногораствораэтилмеркурхлорида, прибавляют 20 мл ацетатной буферной смеси (рН-4,5), 10 млводыи 1 мл 0,01 %-го хлороформногорастворадитизона. Смесь взбалтывают 2—3 мин, а затем отделяют хлороформный слой. Водную фазу в делительной воронке еще взбалтывают с новыми порциями 0,01 %-го хлороформногорастворадитизона(по 1 мл) до тех пор, пока последняя порция этогорастворане перестанет изменять окраску из зеленой в желтую. Хлороформные вытяжки соединяют и выпаривают досуха в струе холодноговоздуха. Сухой остаток растворяют в 0,5 млхлороформа. Полученныйраствориспользуют в качествераствора«свидетеля» при хроматографическом определении гранозана.

68. Индикаторная смесь для обнаружения органических соединений фосфора.К 5 мл лошадиной сыворотки прибавляют 15 млводы, 0,5 мл 0,1 и.растворагидроксида натрияи 1,25 мл 0,6 %-горастворабромтимолового синего в 0,1 н.растворегидроксида натрия.

69. Иод(раствор виодидекалия) 3 гиодида калиярастворяют в 4 млводы, прибавляют 0,25 г сублимированногоиода. Смесь взбалтывают дорастворенияиода, а затем прибавляютводудо 100 мл.

70. Молибдат аммония(раствор). 5 гмолибдата аммониярастворяют в 100 млводы, по каплям прибавляют концентрированнуюазотную кислотудо тех пор, пока не растворится выделяющийся при этом белый осадок.

71. Пероксид водорода в смеси со щелочью.К 3 мл 0,5 %-го водногорастворагидроксида натрияприбавляют 2 мл 3 %-горастворапериоксидаводорода.

72. Смесь сульфата меди, сульфита натрия и гидрокарбоната натрия (раствор).Приготовляют 10%-йрастворсульфата меди(II). 30%-йрастворсульфита натрияи 8 %-йрастворгидрокарбоната натрия. Затем смешивают 10 млрастворасульфата меди(II), 20 млрастворасульфита натрияи 15 млрастворагидрокарбоната натрия.

73. Сульфид аммония(раствор). Через 60 мл 2 н.растворагидроксидааммонияв течение 15—20 мин пропускаютсероводород. После этого прибавляют еще 40 мл 2 н.растворагидроксидааммония.

74. Фосфатный буферный раствор(рН = 7,38). Для приготовления этогораствораприменяют моногидрофосфатнатрияи дигидрофосфаткалия.

В одной колбе в литре дистиллированной водырастворяют 11,876 г моногидрофосфатанатрия. В другой колбе в одном литредистиллированной водырастворяют 9,078 г дигидрофосфатакалия. В мерную колбу вместимостью 500 мл вносят 20 млрастворамоногидрофосфатанатрияи 5 млрастворадигидрофосфатакалия, а затем прибавляютдистиллированную водудо метки.

источник

Проведение клинико-биохимических исследований, приготовление суспензии эритроцитов и гемолизатов. Описание процесса выделения лимфоцитов в градиенте плотности фиколл-верографина по методу Воуum. Приготовление гомогенатов тканей, фракция супернатанта.

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Введение в биохимический практикум

Подготовка биологического материала для биохимических исследований

Подготовка материала для биохимических исследований

Дать представление о видах биологического материала, используемого для анализа, сформировать навыки получения и подготовки биологического материала для биохимических исследований.

Читайте также:  Общий анализ крови рязанский проспект

При проведении биохимических исследований на экспериментальных животных (мыши, крысы, морские свинки, кролики) в качестве биологического материала может использоваться кровь, гомогенаты тканей, субклеточные фракции тканей, моча.

К субклеточным фракциям тканей относятся митохондриальная, микросомальная (образуется из мембран эндоплазматического ретикулума), ядерная, из нервной ткани выделяют миелиновую фракцию.

При клинико-биохимических исследованиях в качестве биологического материала чаще всего используют биологические жидкости — сыворотку и плазму крови, клеточные элементы крови (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты), слюну, слезную и потовую жидкость, а также бронхо-легочный лаваж, выдыхаемый воздух и биопунктаты.

1.1 Получение плазмы крови

При взятии крови с антикоагулянтами (гепарин, цитрат натрия) можно отделить с помощью центрифугирования клеточные элементы от жидкой межклеточной среды — плазмы крови. Плазма крови представляет собой кровь, лишенную клеточных элементов, но содержащую фибриноген и факторы свертывания крови.

Забор крови производят в стеклянные центрифужные пробирки с добавлением раствора гепарина (25 ЕД/мл) или 3,8 % раствора цитрата натрия (1 мл на 10 мл крови), центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут. Плазму крови отбирают пастеровской пипеткой или дозатором (V=l мл) и хранят в холодильнике при +4єС.

1.2 Получение сыворотки крови

Кровь набирают в стеклянные центрифужные пробирки без антикоагулянта и помещают в термостат при +37°С на 1 час. Затем стальной иглой обводят сгусток и коагулированную кровь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин, после чего отбирают надосадочную жидкость — сыворотку. эритроцит гемолизат супернатант воуum

Сыворотка крови представляет собой кровь, лишенную клеточных элементов и фибриногена (предшественника фибрина). Сыворотку крови хранят в холодильнике при +4єС.

1.3 Приготовление суспензии эритроцитов и гемолизатов

После отделения плазмы крови осадок эритроцитов ресуспендируют в 10 мл охлажденного физиологического раствора или забуференного 0,01М трис-HCl буфером рН 7,4 раствора 0,15М NaCl, затем центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин. Осадок трижды промывают физиологическим раствором, из полученного плотного осадка эритроцитов готовят суспензии необходимой концентрации на забуференном рН 7,4 физиологическом растворе. Разведение суспензии эритроцитов производят в соответствии с концентрацией общего белка.

Для получения гемолизатов к 0,1 мл осадка отмытых эритроцитов приливают 10 мл холодной дистиллированной воды и энергично встряхивают. Через 30 мин — 1 час в гемолизатах определяют содержание гемоглобина и активность ферментов.

1. Забуференный 0,01М трис-HCl буфером рН 7,4 раствор 0,15М NaCl

а) приготовление 0,1М трис-HCl буфера рН 7,4: 50 мл 0,1М трис(гидроксиметил)аминометана (12,114 г/л) + 42 мл 0,1М НС1, разбавляют водой до 100 мл.

б) 10 мл 0,1М трис-HCl буфера разбавляют 50 мл Н2О, добавляют 0,89г NaCl. После растворения соли раствор разводят водой до 100 мл.

1.4 Выделение лимфоцитов, нейтрофилов и тромбоцитов

Принцип метода. Для разделения клеточных элементов периферической крови используют ее центрифугирование в градиенте плотности.

3. Среда с градиентом плотности 1,077.

Фиколл растворяют в теплой воде и готовят 9% раствор (плотность 1,025). Верографин (урографин, уротраст) — готовят 36,17% раствор (плотность 1,2) по схеме:

20 мл 60% раствора + 13,18 мл воды или

20 мл 76% раствора + 22,02 мл воды.

Соединяют 7 частей раствора верографина и 16 частей раствора фиколла (28 мл и 64 мл).

Необходимо работать с силиконированными или полиэтиленовыми пробирками.

8 мл крови забирают в пробирку с 3 мл полиглюкина и 2 каплями гепарина.

Кровь отстаивают в течение 60 мин при температуре 25° С. Слой плазмы, обогащенный лейкоцитами, наслаивают на 2 мл среды с градиентом плотности и центрифугируют в течение 35 мин при 1500 об/мин.

После центрифугирования удаляют верхний слой плазмы, переносят кольцо клеток с мононуклеарами (лимфоциты и моноциты) и тромбоцитами в чистую пробирку и удаляют оставшийся слой среды. На дне пробирки остается осадок нейтрофилов и немного эритроцитов.

Затем к суспензии мононуклеаров и тромбоцитов добавляют равный объем раствора Версена и центрифугируют в течение 5 мин при 1000 об/мин. При этом лимфоциты и моноциты окажутся в осадке, а тромбоциты — в супернатанте. В отдельную пробирку снимают верхний слой с тромбоцитами и используют его для работы. Осадок мононуклеаров ресуспендируют в 1 мл среды Хенкса и подсчитывают количество клеток

К осадку нейтрофилов с эритроцитами добавляют 2 мл воды и ровно через 30 с добавляют 2 мл 1,8% раствора NaCl и перемешивают. Центрифугируют в течение 5 мин при 1000 об/мин, супернатант сливают, а нейтрофилы ресуспендируют в 1 мл среды Хенкса и подсчитывают количество клеток.

Количество клеток в суспензии считают в камере Горяева. Если клеток много, суспензию предварительно разводят в 5 раз физиологическим раствором. Количество клеток в 25 больших квадратах умножают на 2500 -получается количество клеток в 1 мл суспензии. Разводят суспензию таким образом, чтобы в 1 мл содержалось 4 млн. клеток [3].

1.5 Выделение лимфоцитов в градиенте плотности фиколл-верографина по методу Воуum (1968)

Выделение чистой популяции лимфоцитов осуществляется на фиколл-верографиновом градиенте, который готовится следующим образом:

1. 76% верографин — 40 мл приливают к 84 мл дистиллированной воды

2. Фиколл — 18г растворяют в 200 мл дистиллированной воды.

Растворы 1 и 2 смешивают в соотношении 7:16 (84 мл верографина и 182 мл фиколла). Плотность готового раствора должна составлять 1,077, если плотность выше, то долить дистиллированной воды, если ниже — то раствор 1.

Смесь стерилизуют в пробирках или флаконах с обратным холодильником. Стерилизацию проводят трехкратно в течение трех дней. Не следует закрывать флаконы ватно-марлевой пробкой.

Для выделения клеток в центрифужные пробирки разливают градиент из расчета 1:1 к объему разведенной крови. К крови добавляют физиологический раствор в соотношении 1:1. Разведенную кровь наслаивают по стенке пробирки на градиентную смесь. При этом определяется четкая граница, однако уже в первую минуту можно видеть, как эритроциты начинают оседать на дно.

Центрифугирование проводят 45 мин при 1500 об/мин. После центрифугирования наблюдается следующая картина (рис.1):

Размещено на http://www.allbest.ru/

Полученное кольцо с лимфоцитами собирают с помощью дозатора в другую пробирку, доливают физиологический раствор до 10 мл и центрифугируют 15 мин при 1500 об/мин [2]

1.6 Приготовление гомогенатов тканей

Ткань крысы (печень, мозг и др.) промывают в ледяном физиологическом растворе, если необходимо перфузируют для удаления крови, затем обсушивают фильтровальной бумагой и делают навеску. Затем навеску ткани (1г) измельчают и помещают в гомогенизатор или фарфоровую ступку, где ткань тщательно растирают на холоду с последующим добавлением (порциями) необходимого объема (10 мл) соответствующего буфера (например, 0,01М трис-HCl буфер, рН 7,4) или забуференного 0,01М трис-HCl буфером рН 7,4 физиологического раствора. Полученный гомогенат ткани используют для биохимического анализа.

1.7 Выделение субклеточных фракций печени крысы

Первым этапом фракционирования органелл клеток является гомогенизация — процедура превращения ткани в гомогенат, или суспензию субклеточных частиц. Гомогенизация должна предусматривать разрушение всех клеток, находящихся в гомогенизаторе, без повреждения их субклеточных структур. Для гомогенизации чаще используют растворы сахарозы различной концентрации, которые способны сохранять интактными большую часть субклеточных структур гомогенатов тканей. Большое значение для успеха фракционирования субклеточных частиц имеет рН среды. Показано, что степень загрязнения гомогената целыми клетками и их оболочками резко возрастает, если рН среды меньше 7,0. В интервале рН от 7,4 до 7,8 число неразрушенных клеток минимально.

Печень крысы промывают раствором холодной 0,25М сахарозы, приготовленной на 0,01М трис-HCl буфере рН 7,4. Затем делают навеску ткани и переносят ее в охлажденный стакан гомогенизатора и добавляют раствор сахарозы из расчета 1:9 (вес:объем). Кусочки ткани осторожно разминают тефлоновым пестиком в течение 1 мин до тех пор, пока они не начинают свободно продавливаться между пестиком и стенками стакана гомогенизатора. Затем соединяют пестик с моторчиком и продолжают гомогенизацию в течение 1 мин при 800-1200 об/мин при постоянном движении пестика вниз и вверх. Вся процедура проводится на холоду в погруженном в ледяную ванну стакане гомогенизатора. Приготовленный подобным образом гомогенат содержит не более 5% неразрушенных клеток и мало поврежденные субклеточные структуры.

1.7.2 Дифференциальное центрифугирование субклеточных структур в растворах сахарозы определенной плотности с выделением фракций в осадок

Принцип метода. Метод основан на поэтапном осаждении отдельных клеточных фракций, сравнительно мало отличающихся по удельному весу, но резко различных по размеру.

Выделение ядерной фракции (диаметр частиц 3000-8000ммк; плотность 1,286-1,328г/см 3 ).

10 мл 10% гомогената (вес:объем) центрифугируют при 600g в течение 10 мин. Надосадочную жидкость (супернатант) сливают; осадок же, содержащий ядра, неразрушенные печеночные клетки и эритроциты, дважды промывают, суспендируя каждый раз в 2,5 мл 0,25М сахарозы в трис-НС1 буфере рН 7,4 и центрифугируя при 600g 10 мин. Смывы объединяют. Промытый осадок суспендируют в сахарозе (конечный объем 2,5 мл) и обозначают как ядерную фракцию (разведение в 2,5 раза в расчете на исходную ткань).

Выделение митохондриальной фракции (диаметр частиц 300-1000ммк; плотность 1,188-1,221 г/см 3 )

Объединенные надосадочную жидкость и смывы центрифугируют при 8500g в течение 10 мин. Супернатант сливают, а осадок дважды промывают 0,25М сахарозой в 0,01М трис-HCl буфере рН 7,4 (по 2,5 мл), центрифугируют каждый раз при 8500g 10 мин. Полученный осадок суспендируют (конечный объем 2,5 мл) и обозначают как митохондриальную фракцию (разведение в 2,5 раза).

Выделение микросомной фракции (диаметр частиц 15-300 ммк; плотность 1,040-1,180 г/см 3 )

Данная фракция объединяет разнородные по морфологическому и биохимическому составу частицы. К ним относятся подфракция рибонуклеопротеидных частиц, участвующих в рибосомальном синтезе белка. Вторая подфракция содержит, главным образом, микросомальные мембраны, образующиеся из мембран эндоплазматического ретикулума.

Объединенный супернатант и промывные жидкости центрифугируют при 18000g в течение 60 мин. Полученный супернатант сливают, осадок суспендируют в 2,5 мл сахарозы и вновь центрифугируют при 18000g 60 мин. Осадок суспендируют в сахарозе (конечный объем 2,5 мл) и обозначают как микросомную фракцию (разведение в 2,5 раза).

Фракция супернатанта, или надосадочной жидкости

Полученный супернатант объединяют со смывом и доводят до объема 25 мл (разведение в 25 раз).

1. 0,05М трис-HCl буфер, рН 7,4

Смешивают 25 мл 0,2М трис с 42,5 мл 0,1М НС1 и доводят до 100 мл водой; 0,05М трис-HCl буфер разводят в 5 раз.

2. Среда выделения: 0,25М сахароза в 0,01М трис-HCl буфере рН 7,4. 85,58г сахарозы растворяют в 1л 0,01М трис-HCl буфера.

1. Современные методы в биохимии /под ред. Ореховича В.Н. М: Медицина, 1968. С.5-59.

2. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Invest, 1968, V.21.S.97. -P.77-89.

3. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма. Санкт-Петербург, 2000. — С.22-23.

Основные методы разделения и выделения веществ при биохимических исследованиях. Количественное определение белка в сыворотке крови. Химическая природа нуклеопротеидов. Применение единиц СИ для выражения результатов клинико-биохимических исследований.

учебное пособие [4,2 M], добавлен 11.03.2013

Примеры работы в титриметрическом анализе. Подготовка посуды, соизмерение мерной колбы и пипетки. Приготовление раствора в мерной колбе и отбор аликвотной части. Приготовление титрованных растворов. Подготовка бюретки и взятие навески, титрование.

методичка [196,5 K], добавлен 20.12.2010

Краткая история развития содовой промышленности. Сырье, используемое в производстве кальцинированной соды. Описание технологического процесса. Приготовление известкового молока. Фильтрация суспензии бикарбоната натрия. Кальцинация гидрокарбоната натрия.

реферат [2,3 M], добавлен 01.07.2008

Определение концентрации кобальта в растворе, температуры раствора и плотности токов. Приготовление электролита, проведение электролиза в ячейках, с использованием нерастворимых анодов (свинец) и медных катодов. Математическое планирование эксперимента.

научная работа [490,2 K], добавлен 29.03.2015

Классификация методов титраметрического анализа. Сущность метода «нейтрализации». Приготовление рабочих растворов. Расчет точек и построение кривых кислотно-основного и окислительно-восстановительного титрования. Достоинства и недостатки йодометрии.

курсовая работа [383,9 K], добавлен 17.11.2013

Строение и физико-химические свойства тетрахлороцинката аммония. Практическое применение тетрахлороцинката аммония. Способы получения тетрахлороцинката аммония. Исходные вещества, приготовление растворов, оборудование. Расчет теоретического выхода.

курсовая работа [32,8 K], добавлен 10.12.2014

Приготовление «изотопного генератора» из материнского радионуклида для многократного получение короткоживущего дочернего радионуклида. Определение активности дочернего радионуклида на момент выделения. Структура и сорбционные свойства ферроцианидов.

лабораторная работа [69,0 K], добавлен 24.12.2009

Характеристика биодеградируемых (биоразлагаемых) полимеров — материалов, которые разрушаются в результате естественных природных (микробиологических и биохимических) процессов. Свойства, способы получения и сферы использования биодеградируемых полимеров.

реферат [25,3 K], добавлен 12.05.2011

Дисперсные системы и гомогенные растворы. Характерные свойства и особенности суспензий. Тонкие и грубые суспензии. Диспергационные и конденсационные методы получения. Суспензии из поверхностно-лиофильных и поверхностно-лиофобных нерастворимых веществ.

презентация [529,4 K], добавлен 26.12.2016

Ионообменные смолы и их применение в цветной металлургии. Их структура и синтез. Приготовление растворов K2Cr2O7 и определение их концентрации. Подготовка смолы АВ-16гс к работе. Динамическая характеристика ионита марки «АВ16-гс» по бихромат-ионам.

реферат [61,4 K], добавлен 21.12.2009

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.

источник