Меню Рубрики

Расшифровка анализа серологического крови на коклюш

Многие из заболеваний детского возраста развиваются у детей только 1 раз за всю жизнь. К ним относятся ветрянка, корь. Особое место среди данных заболеваний занимает коклюш. Мало кто знает, как проводят анализ на коклюш и зачем он нужен.

Так запрограммировано природой, что дети в силу особенностей своего иммунитета болеют чаще, чем взрослые. В первую очередь это обусловлено состоянием их иммунной системы: отсутствие антител ко многим заболеваниям, за исключением тех (антител), что прошли через гематоплацентарный барьер и попали в организм ребенка от матери.

Коклюш — высококонтагиозное заболевание, передающееся воздушно-капельным путем. Это заболевание приходится на детский возраст; взрослые болеют им очень редко (частота встречаемости среди всех заболевших у взрослых не составляет и 0,5 процента).

Возбудитель коклюша у детей — бактерия Борде-Жангу (относится к семейству бордетелл Bordetella pertussis). Является грамотрицательной коккобациллой. Попадает в организм через верхние дыхательные пути (при вдыхании аэрозоля, содержащего микроорганизмы). Попадая в носоглотку, микроорганизм начинает вырабатывать свой основной антиген — коклюшный токсин, на который и вырабатывается иммунный ответ. Непосредственное повреждающее влияние оказывают цитолизин и фимбрии. Каждый из антигенов специфичен и отвечает за определенные функции (лизис эпителиоцитов, адгезия и т.д.).

Бактерия поражает преимущественно дыхательные пути и в крови выделяется крайне редко. Если удалось высеять бактерию из взятого анализа, то стоит готовиться к худшему.

Типичная картина заболевания состоит из синдромов:

  • лихорадочного (повышение температуры выше 38°C);
  • поражения дыхательного тракта (интенсивный кашель, который сложно спутать с другими респираторными заболеваниями);
  • интоксикационного (слабость, тошнота, недомогание), неврологического (нарушение сна на фоне интенсивного кашля).

Часто из-за того, что ребенок сильно и долго кашляет, возможно появление небольших ранок или надрывов в области углов рта, на уздечке нижней губы. Наличие данных признаков косвенно позволяет поставить диагноз коклюша.

Ребенок становится заразным уже с первого дня развития заболевания. Обычно заражение происходит при контакте с другими детьми. Передача возбудителя часто наблюдается в тесных детских коллективах (сады, школы), в результате чего наблюдается массовость заражения.

Своевременная диагностика заболевания должна складываться из наличия типичной картины заболевания, данных анамнеза (контакт с кашляющим ребенком) и изменения лабораторных показателей. Наиболее интересующими являются носовая слизь и мазки из носо- и ротоглотки и кровь.

Как и большинство бактериальных заболеваний, коклюш диагностируется по изменениям анализов при обнаружении бактерии в исследуемом материале. Чаще всего диагноз выставляется при исследовании мазков из носовой полости и ротоглотки, при вырастании колонии бактерий на питательной среде. В кровь же сама бактерия проникает довольно редко (обычно ее попадание в общий кровоток, где кровь стерильна, грозит развитием сепсиса).

Как же можно при помощи крови определить наличие в организме бордетеллы?

В первую очередь для определения того, имеется ли в организме та или иная инфекция, следует сделать общий анализ крови. Процедура несложная и может проводиться на любом уровне оказания медицинской помощи.

В данном анализе выявляют количество клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и гемоглобина) в единице объема крови. Так как коклюш заболевание бактериальное, то как и у всех подобных инфекций в крови обнаруживается увеличение лейкоцитов (лейкоцитоз) с увеличением в лейкоцитарной формуле количества нейтрофилов (определенных клеток, отвечающих за антибактериальный иммунитет). Другие компоненты анализа изменяются редко.

Более специфичным методом является серодиагностика. Принцип ее основан на определении в сыворотке крови антител, свидетельствующих о протекании инфекционного процесса, о наличии перенесенного и поствакцинального иммунитета.

Наиболее часто проводимым методом является реакция агглютинации. Метод зарекомендовал себя уже давно, используется более 50 лет. Данная методика позволяет выявить антитела, образованные к антигенам возбудителя, находящегося в первой фазе развития заболевания. Однако, имеет данная реакция и свои недостатки — она не обладает специфичностью конкретно к бактерии коклюша. Несомненным минусом ее является и то, что до сих пор не создано единой методики проведения данной реакции, из-за чего результаты могут интерпретироваться по-разному.

Суть реакции такова: полистироловый латекс наполняют компонентами коклюшной палочки. Исследуемую сыворотку крови (обычно разведенную в два раза) добавляют к сенсибилизированному латексу. После последующего окрашивания судят о наличии в сыворотке антител к данному возбудителю.

Реакция довольно проста и не требует массивных затрат. Однако из-за того, что в ней используются антигены клеток возбудителя, находящиеся в стадии распада, нередко реакция дает ложноположительные результаты.

Более трудоемким методом диагностики является реакция нейтрализации. Принцип реакции основан на количественном определении вырабатываемых к коклюшному токсину антител путем оценки состояния исследуемой ткани (чаще всего реакцию проводят на специальном субстрате — клетках яичников китайских хомяков). На основании того, как изменились клетки субстрата, судят о количестве нейтрализующих антител.

Метод высокоспецифичен и позволяет определять даже самые малые концентрации антител. Минусом реакции является ее трудоемкость и сложность проведения.

С 1980 года для диагностики заболевания используется иммуноферментный анализ (ИФА). Данная реакция является более специфичной, чем реакция агглютинации, и позволяет получить более точные и достоверные результаты (в определенных условиях).

Методика заключается в следующем: для проведения реакции можно использовать как непосредственно бактерии и бактериальные комплексы, так и компоненты их клеток, однако, при этом возрастает риск развития перекрестных реакций между антигенами коклюшной палочки и антигенами других грамотрицательных бактерий.

В среду или раствор, содержащий бактерии или их антигены, добавляли сыворотку, которую требовалось исследовать на наличие антител к возбудителю. Кроме того, в раствор добавляли специальные флуоресцеин-содержащие ферменты, которые оседали на образованном комплексе антиген-антитело, и в результате исследования делали данные комплексы видимыми под микроскопом (реакция флуоресценции).

При сравнении полученных результатов было видно, что наиболее точные результаты были достигнуты при определении антител к коклюшному токсину, ФГА и комплекса (ФГА, пертактин и КТ).

Данная методика оправдывает себя при определении антител на 4 неделе развития заболевания. До этого в крови антител мало (преобладают среди них иммуноглобулины класса М).

На более ранних этапах развития заболевания серологические методы не особо эффективны и уступают по результативности бактериоскопии, ПЦР и посевам на питательные среды.

Вышеуказанные серологические методы начинают проводиться уже с 4 недели развития заболевания. Диагноз коклюша считается обоснованным при наличии титра антител не ниже 1:80.

Следует помнить, что у детей картина крови может иногда отличаться от классических проявлений коклюша.

Довольно часто наблюдается развитие иммунодефицита примерно на 2-3 неделе развития заболевания. Высок риск присоединения оппортунистической инфекции, из-за чего первичная диагностика коклюша может замедляться, скрываться за клиникой вторичного заболевания. Кроме того, присоединение другой инфекции может вызвать осложнения, из-за которых сам коклюш будет отодвинут на второй план, и лечение будет назначено несвоевременно.

В некоторых случаях может наблюдаться следующий парадокс — казалось бы, заболевание было пролечено и все клинические признаки ушли, однако картина крови остается все той же (нейтрофильный лейкоцитоз и ускоренная СОЭ). Подобная картина может наблюдаться у ослабленных детей с имеющимся иммунодефицитом за счет более длительного персистирования антигенов бактерии Борде-Жангу в организме и замедленной их элиминации.

Как показывает практика, прививка против коклюша не всегда эффективна. Об этом свидетельствует тот факт, что риск заболеть коклюшем остается и у привитых детей (хотя они заболевают примерно в 6 раз реже, чем непривитые), и у взрослых (у них клиническая картина более стерта и заболевание может протекать под видом ОРВИ).

Обычно привитые дети заболевают в результате недостаточной выработки иммунитетом необходимых антител (в данном случае необходима пункция или трепанобиопсия костного мозга для диагностики хронических заболеваний крови). В результате этого риск заболевания у привитых детей возрастает спустя 3-4 года после перенесенной прививки.

При этом у привитых детей часто наблюдается картина относительного лейкоцитоза. В отношении выработки антител применим термин «бустер-эффект» — интенсивная выработка иммуноглобулинов уже на второй неделе развития заболевания.

Как было сказано выше, высевание бактерии из мазка крови крайне неблагоприятно. Это означает, что бактерия уже не развивается в виде локального заболевания, а вышла на системный уровень. Это грозит массивным размножением микроорганизма (кровь является прекрасной средой для развития любого микроорганизма, а в отношении бордетеллы — среда, содержащая кровь, является единственной, на которой бактерия растет).

В результате разноса микроорганизма по органам развивается синдром диссеминации, лечение которого крайне сложное и чаще всего не заканчивается успешно. В данном случае, если во время посева крови удалось высеять бактерию, пациент должен экстренно быть доставлен в отделение реанимации для проведения соответствующего лечения (существует угроза жизни).

Иногда результаты анализов могут быть ложноположительными. Это наблюдается в результате персистирования в организме антигенов бактерии (после перенесенного коклюша). Реже наблюдается ситуация перекрестной реакции антигенов, когда при наличии другого граммотрицательного микроорганизма проведение тестов на антитела к коклюшу дают положительный результат. В данном случае единственным методом диагностики является ПЦР для установления типа генетического материала, вызвавшего подобную реакцию микроорганизма.

Если все же был коклюш у детей, при правильной диагностике и своевременном лечении картина крови должна нормализоваться. В пределах нормы считается состояние, при котором лейкоцитоз может наблюдаться некоторое время (обычно до полутора недель) после перенесенного заболевания. После этого в крови появляются специфические иммуноглобулины класса G, которые отвечают за развитие постоянного, пожизненного иммунитета против коклюша. Выявление данных антител проводится серологическими методами.

Несмотря на то что коклюш является заболеванием преимущественно детского возраста, знать о том, как оно проявляется, должен каждый человек. Не существует стопроцентной гарантии того, что заболевание не разовьется даже у привитого или перенесшего его человека. Именно поэтому крайне важно знать о том, как может проявиться заболевание, где и каким образом диагностировать его развитие.

источник

Современная диагностика коклюша позволяет быстро поставить правильный диагноз и назначить адекватное лечение, что позволяет значительно облегчить состояние больного и провести своевременные профилактические мероприятия, предотвратив заражение окружающих и контактных лиц. Анализ на коклюш с применением бактериологического метода исследования является основным в диагностике заболевания.

Однако опыт многих исследований доказывает, что для точной лабораторной диагностики заболевания необходимо использовать несколько взаимодополняющих методик. Наиболее эффективная комбинация — сочетание бактериологического метода и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Рис. 1. Спазматический приступообразный кашель — доминирующий симптомом коклюша у детей.

Распознавание коклюша на ранних этапах развития заболевания претерпевает большие трудности, что связано с несколькими факторами:

  • Болезнь развивается медленно. Ее кульминация приходится на 2 — 3 неделю после возникновения первых симптомов заболевания.
  • Первичный токсикоз и выраженная температурная реакция вначале заболевания, так характерные для многих детских инфекционных заболеваний, при коклюше отсутствуют. Поэтому часто лабораторная диагностика запаздывает.
  • У привитых детей и взрослых чаще всего регистрируются атипичные формы заболевания, при которых меняется характеристика кашля (отсутствуют приступы спазматического кашля и репризы).

Критерии постановки диагноза коклюша в предсудорожный (катаральный) период:

  • Контакт с больными, у которых отмечается длительный кашель.
  • Медленное развитие заболевания. Нормальная или небольшая температура тела. Удовлетворительное состояние больного.
  • Отсутствие выраженных катаральных явлений.
  • Вначале покашливание, а потом упорный сухой кашель до перехода в приступообразный спазматический кашель длится 1 — 2 недели.
  • Эффект от симптоматической терапии отсутствует.
  • Хрипы в легких часто не выслушиваются. Высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ).
  • Обнаружение в посевах возбудителей коклюша (Bordetella pertussis).

Рис. 2. На фото бактерии Bordetella pertussis розового цвета под микроскопом (окраска по Граму). Коклюшные палочки короткие, коковидной формы, концы закруглены, длина составляет 0,5 — 2 мкм, в мазках располагаются отдельно, реже — попарно.

Рис. 3. Вид бактерий коклюша в электронный микроскоп.

Выделение возбудителей коклюша из носоглоточной слизи — классический метод лабораторного подтверждения заболевания. Высеваемость возбудителей редко достигает 80%. В среднем он не превышает 10 — 30%. Причиной этому являются:

  • Медленный рост коклюшных палочек на питательных средах.
  • Низкое качество питательных сред.
  • Позднее обследование больного.
  • Загрязнение исследуемого материала бактериальной флорой.
  • Погрешности при заборе исследуемого материала.
  • Применение антибиотиков до момента забора материала для бактериологического исследования.

Материалом для бактериологического исследования служит мазок из носовых ходов (обеих) и задней стенки носоглотки (не из гортани!).

Для взятия мазка применяется тампон из дакрона или используется метод «кашлевых пластинок».

Посев производится сразу на питательную или транспортную среды. На транспортной среде материал хранится не более одних суток. Предварительный ответ получается на 3 — 5 сутки. Окончательный ответ получается на 5 — 7 сутки.

Обследованию подлежат лица с подозрением на заболевание и лица, кашель у которых сохраняется более 7-и, но не более 30-и дней.

Рис. 4. На фото колонии Bordetella pertussis. Для культивирования используется среда Борде-Жангу (фото справа) или казеиново-угольный агар (фото слева). На этих средах формирование колоний происходит на 3 — 4 день после посева. Колонии микробов блестящие, серовато-кремовой окраски, напоминают по внешнему виду капельки ртути, имеют вязкую консистенцию. После снятия колоний с питательной среды остается сметанообразный след.

Рис. 5. При просмотре колоний Bordetella pertussis в световом микроскопе можно видеть, как колонии отбрасывают тень (световой конус).

Диагностика коклюша с применением ПЦР (полимеразной цепной реакции) является самой перспективной методикой в современных условиях. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять ДНК бактерий, даже если в исследуемом материале их несколько единиц.

Методика определения ДНК Bordetella pertussis с помощью ПЦР была разработана в Новосибирске в 1999 году. Она имеет целый ряд преимуществ перед бактериологическим методом:

  • Высокая чувствительность данного метода. Даже наличие одного или нескольких возбудителей в пробе позволяет получить положительный результат.
  • Данный метод является высокоспецифичным. Удельный вес положительных результатов составляет 85 — 100%. Загрязнение вторичной микрофлорой не влияет на результат исследования.
  • Результат получается в течение 1-го дня.

Данный метод диагностики не заменяет культуральный метод.

Бактериологический метод и методика ПЦР являются взаимодополняющими и достоверными тестами при выявлении Bordetella pertussis.

Рис. 6. На фото виды колоний Bordetella pertussis.

Низкий удельный вес бактериологического подтверждения заболевания стал толчком к разработке других, более чувствительных методов идентификации возбудителя коклюша. В 60-е годы появился метод определения Bordetella pertussis с помощью флюоресцирующих антител. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп. К проведению данного теста допускается только высококвалифицированный персонал, используются качественные реагенты. В противном случае возможно большое количество ложноположительных результатов. Данная методика в практической медицине используется редко.

Рис. 7. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп.

Возбудители коклюша содержат вещества (антигены), способные вызвать иммунный ответ в организме инфицированного человека (образование антител). Благодаря серологическим исследованиям выявляются и изучаются антитела и антигены в сыворотке крови больного. В их основе лежат иммунные реакции организма. Специфичность данного вида исследования не достигает 100%, поэтому результаты серологического исследования оцениваются только с учетом клинической картины заболевания. Серологические методы используются так же для проведения эпидемиологического анализа.

Для диагностики коклюша используется несколько тестов:

  • Иммуноферментный анализ (ИФА) — чувствительный, специфичный и относительно недорогой тест. Для его проведения используются белковые антигены бактерий коклюша, с помощью которых измеряются сывороточные иммуноглобулины классов G, M и A, уровень которых повышаются в крови после перенесенного заболевания или проведения иммунизации. Сывороточные иммуноглобулины M повышаются в ранние сроки заболевания, сывороточные иммуноглобулины G — в более поздние сроки.
  • Диагностика коклюша на поздних сроках заболевания осуществляется с помощью реакций агглютинации: РПГА, РНГА и РА. В основе таких реакций лежит способность корпускулярных антигенов склеиваться с помощью антител.

к содержанию ↑

Экспресс-методы лабораторной диагностики коклюша позволяют за несколько минут определить антигены в слизи задней стенки глотки.

При использовании реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) врач может получить результаты через 2 — 6 часов.

При использовании метода латексной микроагглютинации (ЛМА) антигены коклюшных бактерий выявляются через 30 — 40 минут.

Применение методов экспресс-диагностики увеличивают в несколько раз удельный вес лабораторно подтвержденных случаев заболевания.

Изменения клеточного состава крови: высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ) чаще выявляются у невакцинированных детей.

В какой бы форме не протекал коклюш, сегодня врачи имеют возможность в ранние сроки провести лабораторную диагностику этого заболевания.

Рис. 8. На фото слева лейкоциты, справа — лимфоциты. При коклюше их количество значительно увеличивается.

Метод дифференциальной диагностики позволяет исключить целый ряд возможных заболеваний у больных и установить единственно правильный диагноз. Правильно проведенная дифференциальная диагностика коклюша позволяет своевременно назначить больному адекватное лечение, тем самым облегчив течение заболевания.

Коклюш следует дифференцировать от ОРВИ, паракоклюша, бронхита, бронхиальной астмы, наличия инородных тел в дыхательных путях, пневмоний, туберкулезного бронхоаденита и др.

  • Самые большие трудности представляет диагностика заболевания в катаральном периоде. Коклюш в этот период имеет много сходных черт с целой группой острых респираторных вирусных заболеваний, а так же с корью и паракоклюшем. Для коклюша в этот период характерен упорный, нарастающий кашель и отсутствие или слабая выраженность катаральных явлений верхних дыхательных путей. В этот период необходимо применять экспресс-методики и бактериологическую диагностику коклюша.
  • В период приступов спазматического кашля коклюш следует различать от острых респираторных заболеваний с обструктивным синдромом, острых вирусных заболеваний с преимущественным поражением нижних отделов респираторного аппарата, респираторного микоплазмоза, туберкулезного бронхоаденита, аспирации инородного тела, опухоли средостения, бронхолегочной формой муковисцидоза.

Рис. 9. Современная диагностика коклюша позволяет быстро поставить правильный диагноз. А своевременное адекватное лечение позволит значительно облегчить состояние больного ребенка и провести профилактические мероприятия, тем самым предотвратив заражение контактных лиц.

источник

Современная диагностика коклюша позволяет быстро поставить правильный диагноз и назначить адекватное лечение, что позволяет значительно облегчить состояние больного и провести своевременные профилактические мероприятия, предотвратив заражение окружающих и контактных лиц. Анализ на коклюш с применением бактериологического метода исследования является основным в диагностике заболевания.

Однако опыт многих исследований доказывает, что для точной лабораторной диагностики заболевания необходимо использовать несколько взаимодополняющих методик. Наиболее эффективная комбинация — сочетание бактериологического метода и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Рис. 1. Спазматический приступообразный кашель — доминирующий симптомом коклюша у детей.

Распознавание коклюша на ранних этапах развития заболевания претерпевает большие трудности, что связано с несколькими факторами:

  • Болезнь развивается медленно. Ее кульминация приходится на 2 — 3 неделю после возникновения первых симптомов заболевания.
  • Первичный токсикоз и выраженная температурная реакция вначале заболевания, так характерные для многих детских инфекционных заболеваний, при коклюше отсутствуют. Поэтому часто лабораторная диагностика запаздывает.
  • У привитых детей и взрослых чаще всего регистрируются атипичные формы заболевания, при которых меняется характеристика кашля (отсутствуют приступы спазматического кашля и репризы).

Критерии постановки диагноза коклюша в предсудорожный (катаральный) период:

  • Контакт с больными, у которых отмечается длительный кашель.
  • Медленное развитие заболевания. Нормальная или небольшая температура тела. Удовлетворительное состояние больного.
  • Отсутствие выраженных катаральных явлений.
  • Вначале покашливание, а потом упорный сухой кашель до перехода в приступообразный спазматический кашель длится 1 — 2 недели.
  • Эффект от симптоматической терапии отсутствует.
  • Хрипы в легких часто не выслушиваются. Высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ).
  • Обнаружение в посевах возбудителей коклюша ( ).

Рис. 2. На фото бактерии Bordetella pertussis розового цвета под микроскопом (окраска по Граму). Коклюшные палочки короткие, коковидной формы, концы закруглены, длина составляет 0,5 — 2 мкм, в мазках располагаются отдельно, реже — попарно.

Читайте также:  Увеличение plt в анализе крови

Рис. 3. Вид бактерий коклюша в электронный микроскоп.

Выделение возбудителей коклюша из носоглоточной слизи — классический метод лабораторного подтверждения заболевания. Высеваемость возбудителей редко достигает 80%. В среднем он не превышает 10 — 30%. Причиной этому являются:

  • Медленный рост коклюшных палочек на питательных средах.
  • Низкое качество питательных сред.
  • Позднее обследование больного.
  • Загрязнение исследуемого материала бактериальной флорой.
  • Погрешности при заборе исследуемого материала.
  • Применение антибиотиков до момента забора материала для бактериологического исследования.

Материалом для бактериологического исследования служит мазок из носовых ходов (обеих) и задней стенки носоглотки (не из гортани!).

Для взятия мазка применяется тампон из дакрона или используется метод «кашлевых пластинок».

Посев производится сразу на питательную или транспортную среды. На транспортной среде материал хранится не более одних суток. Предварительный ответ получается на 3 — 5 сутки. Окончательный ответ получается на 5 — 7 сутки.

Обследованию подлежат лица с подозрением на заболевание и лица, кашель у которых сохраняется более 7-и, но не более 30-и дней.

Рис. 4. На фото колонии Bordetella pertussis. Для культивирования используется среда Борде-Жангу (фото справа) или казеиново-угольный агар (фото слева). На этих средах формирование колоний происходит на 3 — 4 день после посева. Колонии микробов блестящие, серовато-кремовой окраски, напоминают по внешнему виду капельки ртути, имеют вязкую консистенцию. После снятия колоний с питательной среды остается сметанообразный след.

Рис. 5. При просмотре колоний Bordetella pertussis в световом микроскопе можно видеть, как колонии отбрасывают тень (световой конус).

Диагностика коклюша с применением ПЦР (полимеразной цепной реакции) является самой перспективной методикой в современных условиях. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять ДНК бактерий, даже если в исследуемом материале их несколько десятков.

Методика определения ДНК с помощью ПЦР была разработана в Новосибирске в 1999 году. Она имеет целый ряд преимуществ перед бактериологическим методом:

  • Высокая чувствительность данного метода. Даже наличие одного или нескольких возбудителей в пробе позволяет получить положительный результат.
  • Данный метод является высокоспецифичным. Удельный вес положительных результатов составляет 85 — 100%. Загрязнение вторичной микрофлорой не влияет на результат исследования.
  • Результат получается в течение 1-го дня.

Данный метод диагностики не заменяет культуральный метод.

Бактериологический метод и методика ПЦР являются взаимодополняющими и достоверными тестами при выявлении Bordetella pertussis.

Рис. 6. На фото виды колоний Bordetella pertussis.

Низкий удельный вес бактериологического подтверждения заболевания стал толчком к разработке других, более чувствительных методов идентификации возбудителя коклюша. В 60-е годы появился метод определения с помощью флюоресцирующих антител. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп. К проведению данного теста допускается только высококвалифицированный персонал, используются качественные реагенты. В противном случае возможно большое количество ложноположительных результатов. Данная методика в практической медицине используется редко.

Рис. 7. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп.

Возбудители коклюша содержат вещества (антигены), способные вызвать иммунный ответ в организме инфицированного человека (образование антител). Благодаря серологическим исследованиям выявляются и изучаются антитела и антигены в сыворотке крови больного. В их основе лежат иммунные реакции организма. Специфичность данного вида исследования не достигает 100%, поэтому результаты серологического исследования оцениваются только с учетом клинической картины заболевания. Серологические методы используются так же для проведения эпидемиологического анализа.

Для диагностики коклюша используется несколько тестов:

  • Иммуноферментный анализ (ИФА) — чувствительный, специфичный и относительно недорогой тест. Для его проведения используются белковые антигены бактерий коклюша, с помощью которых измеряются сывороточные иммуноглобулины классов G, M и A, уровень которых повышаются в крови после перенесенного заболевания или проведения иммунизации. Сывороточные иммуноглобулины M повышаются в ранние сроки заболевания, сывороточные иммуноглобулины G — в более поздние сроки.
  • Диагностика коклюша на поздних сроках заболевания осуществляется с помощью реакций агглютинации: РПГА, РНГА и РА. В основе таких реакций лежит способность корпускулярных антигенов склеиваться с помощью антител.

Экспресс-методы лабораторной диагностики коклюша позволяют за несколько минут определить антигены в слизи задней стенки глотки.

При использовании реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) врач может получить результаты через 2 — 6 часов.

При использовании метода латексной микроагглютинации (ЛМА) антигены коклюшных бактерий выявляются через 30 — 40 минут.

Применение методов экспресс-диагностики увеличивают в несколько раз удельный вес лабораторно подтвержденных случаев заболевания.

Изменения клеточного состава крови: высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ) чаще выявляются у невакцинированных детей.

В какой бы форме не протекал коклюш, сегодня врачи имеют возможность в ранние сроки провести лабораторную диагностику этого заболевания.

Рис. 8. На фото слева лейкоциты, справа — лимфоциты. При коклюше их количество значительно увеличивается.

Метод дифференциальной диагностики позволяет исключить целый ряд возможных заболеваний у больных и установить единственно правильный диагноз. Правильно проведенная дифференциальная диагностика коклюша позволяет своевременно назначить больному адекватное лечение, тем самым облегчив течение заболевания.

Коклюш следует дифференцировать от ОРВИ, паракоклюша, бронхита, бронхиальной астмы, наличия инородных тел в дыхательных путях, пневмоний, туберкулезного бронхоаденита и др.

  • Самые большие трудности представляет диагностика заболевания в катаральном периоде . Коклюш в этот период имеет много сходных черт с целой группой острых респираторных вирусных заболеваний, а так же с корью и паракоклюшем. Для коклюша в этот период характерен упорный, нарастающий кашель и отсутствие или слабая выраженность катаральных явлений верхних дыхательных путей. В этот период необходимо применять экспресс-методики и бактериологическую диагностику коклюша.
  • В период приступов спазматического кашля коклюш следует различать от острых респираторных заболеваний с обструктивным синдромом, острых вирусных заболеваний с преимущественным поражением нижних отделов респираторного аппарата, респираторного микоплазмоза, туберкулезного бронхоаденита, аспирации инородного тела, опухоли средостения, бронхолегочной формой муковисцидоза.

Характерные приступы судорожного кашля с протяжными выдохами не всегда присутствуют у детей, получивших прививки, например, АКДС. Поэтому врачи и родители рассчитывают, что анализ на коклюш расставит все точки над «и». Заразная болезнь особенно тяжело протекает у детей первого года жизни. Инкубационный период составляет в среднем 1–2 недели, начальные симптомы напоминают ОРВИ.

Род Bordetella объединяет 9 видов бактерий, из которых сильными патогенными свойствами обладают B. pertussis и B. parapertussis — соответственно возбудитель коклюша и паракоклюша (коклюшеподобной инфекции). Это грамотрицательные, аэробные коккобациллы. Патогенные свойства B. pertussis связаны с выделением коклюшного токсина белковой природы. Токсичные вещества бактерий в инактивированной форме включают в состав коклюшных вакцин.

Оптимальная температура выращивания культуры бордетеллы при бактериологическом посеве составляет 35°C. Возбудитель коклюша размножается на специальной среде картофельно-глицеринового либо казеиново-угольного агара. Через несколько дней возникают колонии, имеющие выпуклую форму, с серебристой поверхностью. По мере хранения выделенных штаммов проявляется изменчивость, прежде всего, меняются иммуногенные свойства возбудителя.

Перед тем, как сдавать анализ на коклюш, необходимо учесть, что симптомы интоксикации не проявляются сразу же после заражения. Затем усиливается ночью и по утрам приступообразный кашель. Лицо больного ребенка краснеет, периодически возникают характерные для коклюша вдохи. Завершается такой приступ отхождением вязкой мокроты либо рвотой.

Периодичность течения заболевания

Названия периода Продолжительность Признаки и симптомы
Инкубационный От дней до 14 суток (в среднем — одна неделя)
Предсудорожный От трех дней до двух недель Сухой навязчивый кашель. Температура нормальная
Судорожный От двух недель до двух месяцев и более Характерные шумные вдохи во время судорожного кашля. Отхождение мокроты или рвота после приступа
Обратное развитие От двух недель до двух месяцев Кашель становится редким. Самочувствие ребенка улучшается
Поздняя реконвалесценция
(выздоровление)
От двух до шести месяцев Приступообразный кашель возникает только при нагрузках, волнении, других заболеваниях

Лабораторный посев и ПЦР-исследование обычно назначают в предсудорожном периоде, когда еще нет специфических вдохов при кашле. Учитываются при этом такие диагностические признаки коклюша, как непосредственные контакты с больным человеком в детском саду, школе или семье. Врач, направляя ребенка на бактериологический посев и ПЦР, также смотрит на результаты общего анализа крови.

Врачи выбирают алгоритм исследования в зависимости от возраста маленького пациента, длительности проявления симптомов заболевания, вакцинального статуса. Основной метод лабораторной диагностики — бактериологический анализ на коклюш и паракоклюш. Флюорографию назначают для исключения заболевания с похожими симптомами (острый бронхит, воспаление легких, плеврит).

Специалист в первую очередь обращает внимание на клиническую картину при осмотре ребенка, опрашивает родителей. Врач назначает исследования, способные подтвердить диагноз, при отсутствии явных симптомов заболевания. Ценный материал для педиатра дает результат анализа на коклюш в «Инвитро» (диагностическом центре). Высокий уровень лабораторной диагностики позволят определить степень тяжести заболевания, выявить осложнения инфекции.

От правильного определения примерного срока инфицирования зависит выбор специалистами лабораторных тестов.

Какие анализы сдавать для диагностики возбудителя коклюша и паракоклюшной инфекции

  1. Мазок из глотки — позволяет выделить культуру бактерий с помощью микробиологического посева.
  2. Иммуноферментный анализ крови — метод ИФА для определения антигенов и антител.
  3. Полимеразная цепная реакция — тест ПЦР для выделения ДНК возбудителя.

Примерная схема лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша

Методы 1–2 недели от начала заболевания 3–4 недели Свыше 4 недель
Категории Без лечения антибиотиком На фоне антибиотика Без лечения антибиотиком На фоне антибиотика Без лечения/с лечением
Непривитые
дети до 1 года
Бак. посев, метод ПЦР ПЦР Бак. посев, метод ПЦР ПЦР, серология Серология
Непривитые дети старше 1 года Бак. посев, метод ПЦР ПЦР ПЦР, серология,
бак. посев
Серология Серология
Привитые дети, подростки Метод ПЦР, бак. посев ПЦР ПЦР, серология Серология Серология

Получение результата бактериального посева занимает несколько дней. Между тем, экспресс-тест ПЦР дает возможность расшифровать диагноз спустя всего несколько часов. Информативность вышеперечисленных методов диагностики выше у невакцинированных детей. После четырех недель прямые тесты уже не столь эффективны для выделения и определения возбудителя коклюша. Серология позволяет уточнить картину в поздние периоды заболевания даже у ранее вакцинированных детей.

Медперсонал берет мазок у детей с задней стенки глотки, далее высевает на питательную смесь в специальных лабораторных емкостях, где происходит развитие микробов в течение нескольких дней. Готовый материал тщательно изучается под микроскопом, чтобы выделить колонии B. pertussis или B. parapertussis. Бактериологическое исследование рассчитано на то, что в начале заболевания бактерии находятся в глотке и носовой полости.

Бактериологический посев считается «золотым стандартом» диагностики коклюшной инфекции у детей.

Микробиологический посев с последующим микроскопическим исследованием при коклюше позволяет диагностировать либо исключить инфекцию. Если результаты анализа положительные, то необходимо начать адекватное лечение и профилактику осложнений. Однако бактериологическое исследование малодостоверно на фоне терапии антибактериальными средствами.

Забор материала тампоном из глотки доставляет незначительный дискомфорт взрослому, но малыши обычно сопротивляются и капризничают. Для такого случая предусмотрен вариант забора слизи для исследования из носа. Перед тем, как сдать анализ, рекомендуется не полоскать горло, не чистить зубы, не закапывать лекарства в нос. Необходимо, чтобы в глотке и в носовой полости накопилась мокрота с возбудителем заболевания.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — исследование бактериальной ДНК. Метод ПЦР позволяет диагностировать коклюш на молекулярно-генетическом уровне. Биологический материал получают при заборе мокроты больного коклюшем. Метод полимеразной цепной реакции часто используют при отрицательных результатах бактериологического исследования.

Лабораторный иммуноферментный анализ подходит для периода заболевания, когда в организме уже вырабатываются антитела. Методика ИФА основывается на качественном определении антигенов и специфических антител в кровяной плазме. Наличие иммуноглобулинов М характерно для самого заболевания, а иммуноглобулины G циркулируют в крови уже после перенесенной инфекции.

Если антител к антигенам возбудителя в анализе крови на коклюш не обнаружат, то ребенок не болен и не перенес инфекцию ранее.

Серологический тест может назначаться для ретроспективной диагностики коклюша, выявления очага инфекции и предупреждения ее распространения. Расшифровка результата покажет в крови больных и переболевших детей повышение уровней специфических иммуноглобулинов М и G к токсинам бактерий Bordetella.

Общий анализ крови при коклюше указывает на наличие либо отсутствие воспалительного процесса в организме ребенка. Заболевание коклюшем можно заподозрить при повышенном количестве лимфоцитов и лейкоцитов, при этом показатели СОЭ будут в норме. Врачи рекомендуют сдавать кровь на анализ в утренние часы, перед завтраком.

Лечение коклюша в РФ включено в программу ОМС, в государственных медучреждениях проводят все необходимые мероприятия. Альтернативная возможность обследования — обращение в диагностические центры «Инвитро». Врач-консультант лаборатории объяснит назначение каждого анализа, даст его подробную расшифровку.

Как проводится лабораторная диагностика (анализы) коклюша и паракоклюша? обновлено: Май 17, 2016 автором: admin

Коклюш является бактериальной инфекцией с воздушно-капельным механизмом передачи.

В общем анализе крови у детей больных коклюшем выявляют пониженное количество лейкоцитов (2-7*10 9 /л), в преобладают лимфоциты. Нужно учитывать что степень повышения уровня зависит от степени тяжести заболевания, а у привитых, ослабленных, детей со стертыми формами коклюша изменения в анализе отсутствуют. в пределах нормы или снижена. Сдвиги в картине крови находят только в катаральной стадии коклюша.

Общий анализ мочи и биохимический анализ крови проводят с целью выявления возможных осложнений. При благоприятном течении коклюша они не изменены.

Общий анализ мокроты дает возможность отличить коклюш от бронхиальной астмы, туберкулеза, . Мокрота при коклюше слизистая, в случае присоединения пневмонии становится слизисто-гнойной или гнойной.

Значительную помощь врачу в постановке диагноза, особенно в ранней стадии, оказывает бактериологический метод исследования — посев на питательные среды. Длительное время для выявления бактерии коклюша использовали метод «кашлевых пластинок», предложенный Мауритценом. Во время приступа кашля на расстоянии 5-8 см от ребенка размещают открытую чашку Петри с питательной средой. Микроскопические капли слизи, содержащие бактерию коклюша, вылетают изо рта и оседают на питательной среде. Через 2-4 дня по полученной культуре микробов можно поставить диагноз. Данный метод имеет недостаток — он малоэффективен у маленьких деток, которые «плохо» кашляют и детей у которых кашля нет.

Более современный метод определения возбудителя коклюша — бактериологический посев материала из носоглотки и из-под язычка. Бактериологический метод диагностики коклюша — самый эффективный, но после 4-5 недели от начала заболевания проводить его не целесообразно, возбудитель не выделяется. Ранее начало приема антибиотиков также снижает вероятность определения бордетеллы коклюша.

Ранее использовались РСК и РПГА. Повышения титра антител к коклюшу в четыре раза подтверждает диагноз.

Иммунологические методы анализа крови и выделений из носа при коклюше выявляют наличие антител — (Ig M) (в крови) и (IgA) (слизь из носа) начиная с 3 недели заболевания. Сохраняются они в повышенных концентрациях на протяжении 3-4 месяцев. к коклюшу начинают образовываться через 4 недели от начала болезни и сохраняются в крови несколько лет. Но их анализ имеет ретроспективное значение, позволяя судить о том, переболел ли ребенок коклюшем.

Анализы при коклюше was last modified: Август 10th, 2017 by Мария Бодян

Коклюш – острая инфекция верхних дыхательных путей, которая передается воздушно-капельным путем и характеризуется мучительным спастическим кашлем. Заболеванию в основном подвержены дети дошкольного возраста, а в редких случаях может произойти заражение взрослых людей, переболевших коклюшем в детском возрасте. Виновником является аэробная грамотрицательная коккобацилла Bordettella pertussis. Анализ на коклюш – поможет своевременно выявить патологию и определить верную тактику лечения.

Коклюш относится к очаговым инфекциям, вспышки которых отмечаются каждые 4-5 лет. Перенесенное в детстве заболевание не гарантирует стойкого иммунитета, поэтому иногда случается рецидив болезни. Многих волнует вопрос: «Сколько проходит времени после прививки, чтобы организм человека стал уязвимым по отношению к инфекции?» Через 12-15 лет после введения вакцины, иммунитет ослабевает и у вновь заболевших инфекция протекает со смазанной симптоматикой – без характерных приступов кашля, как обычная ОРВИ. Опасность заключается в том, что люди, не подозревающие о заболевании, могут, стать источником заражения для новорожденных не прошедших вакцинацию.

Болезнь представляет особую опасность для людей с ослабленным иммунитетом, бронхиальной астмой и может вызвать типичные осложнения:

  • поражения бронхов, легких и сердечно-сосудистой системы;
  • пневмококлюш;
  • конъюнктивальные кровоизлияния;
  • энцефалопатию;
  • пневмонию и бронхит;
  • асфиксию.

Входными воротами для инфекции является поверхность верхних дыхательных путей. Возбудитель заселяет слизистую эпителия гортани, трахеи и бронхов. Экзотоксины, выделяемые колонизатором в кровь, вызывают чувствительность к гистамину, раздражают дыхательный центр и вызывают приступы кашля.

Инкубационный период длится от 5 до 14 дней и характеризуется катаральными явлениями: легким кашлем, насморком, слегка повышенной температурой тела.

По окончании инкубационного периода возбудитель инфекции начинает выделять токсины. В это время проявляются основные симптомы: упорный спазматический кашель с серией кашлевых толчков и свистом на вдохе, так называемой репризой. По окончании выделяется вязкая мокрота, иногда приступ может закончиться рвотой, а в тяжелых случаях асфиксией и судорогами. В этот период в крови значительно повышен уровень специфических иммуноглобулинов. Обострение может продолжаться около месяца, после чего приступы становятся реже и заканчиваются обычным кашлем, который полностью проходит через несколько недель.

Заболевание диагностируется с учетом данных анамнеза и результатов лабораторных исследований.

В соответствии с лечебным протоколом для диагностики применяют несколько видов лабораторных исследований. Выбор метода зависит от предполагаемого срока инфицирования:

  • бактериологический посев на коклюш – делается в периоде 2-3 недель от начала заболевания;
  • ПЦР — молекулярно – генетический – метод позволяет определить ДНК бактерии, и информативен в первые несколько недель от начала инфекции;
  • серологические методы (РНГА, РА, РПГА) – используются для диагностики на поздних сроках;
  • общий анализ крови;
  • к инструментальным методам исследования можно отнести флюорографию, которая выполняется для исключения пневмонии, плеврита или острого бронхита.

Целью исследований является лабораторное подтверждение диагноза, определение степени тяжести и своевременное выявление осложнений, какие очень часто могут вызывать хронические патологии. В настоящее время внедряются экспресс-методы диагностики, которые позволяют уже через несколько часов расшифровать диагноз или выявить другие заболевания со схожими симптомами. У детей, не прошедших вакцинацию, для определения возбудителя применяют такой метод, как ПЦР. Для ранее вакцинированных наиболее эффективны серологические исследования.

Бактериологический метод считается золотым стандартом для обнаружения инфекции на начальной стадии заболевания. Посев на коклюш или бак-исследование проводиться в катаральном периоде и заключается в заборе материала с задней стенки глотки (мазок). Бактерии высевают на питательную смесь и проращивают в стерильных условиях с последующим их тщательным изучением. Рост микробов происходит в течение нескольких дней, что дает возможность диагностировать или исключить коклюш. Своевременное выявление коккобациллы, достоверная и быстрая расшифровка исследования позволяет начать лечение на ранних стадиях и предупредить возможные осложнения.

Необходимо отметить, что бактериологическое исследование наиболее эффективно в катаральной стадии заболевания. Анализ не определяет возбудителя коклюша в позднем периоде или на фоне приема антибиотиков.

Забор образца не сопровождается неприятными явлениями или дискомфортом, хотя маленькие дети активно сопротивляются попыткам взять мазок. В таких случаях пробу могут взять тампоном из носа. Сдавать анализ рекомендуется утром, когда в дыхательных путях, носовых проходах и гортани скопилось значительное количество слизи и мокроты. Как оптимальный вариант можно рассматривать забор материала перед чисткой зубов и утренним приемом пищи.

Серологическая диагностика не подходит для раннего выявления возбудителя, так как антитела в крови вырабатываются только после третьей недели болезни. В основном исследования проводят для ретроспективного определения коклюша, позволяя ставить верный диагноз после того, как человек выздоровел. Методика эффективна при обследовании очагов инфекции для предотвращения эпидемии.

  • РПГА – иммунологический метод реакции непрямой гемагглютинации клеток. Максимально точно определяет титр антител в крови к возбудителю, и позволяет узнать, какие виды микроорганизмов присутствуют на момент изучения исследуемого материала. Помимо этого, анализ определяет чувствительность к антибиотикам, что позволяет подобрать наиболее эффективные препараты для терапии. Сдавать кровь из вены рекомендуется натощак.
  • ИФА – иммуноферментное экспресс-исследование крови, позволяющее выявить наличие иммуноглобулинов М, что является доказательством заболевания; обнаружение иммуноглобулинов G в сыворотке крови свидетельствует о перенесенной инфекции, а отсутствие антител как таковых, позволяет убедиться в том, что человек не болен коклюшем на данный период времени и никогда не был инфицирован раньше.
  • ПЦР – полимерная цепная реакция. На сегодняшний день самый достоверный метод обнаружения инфекций. Для исследования чаще всего собирают мокроту. Методика эффективна в отношении изменчивых возбудителей и может использоваться не только для исследования материала, полученного от больного, но и для обследования объектов внешней среды, таких как вода и верхний слой почвы. ПЦР-анализ сдают больные в тех случаях, когда невозможно обнаружить возбудителя инфекции бактериологическим и иммунологическими методами. Для получения результатов не требуется выращивание колоний возбудителя, а полная автоматизация процесса и высокое качество реактивов не позволяют сколько-нибудь усомниться в достоверности результата.
Читайте также:  Общий анализ крови палец завтракать

Общий анализ крови традиционно используется для выявления воспалительных реакций в организме. Для большей точности кровь сдают натощак в утреннее время. На наличие заболевания может указать характерное сочетание следующих показателей:

  • СОЭ – норма;
  • лимфоциты и лейкоциты – повышены.

Ухудшение экологии и интенсивность городской жизни обуславливает возникновение заболеваний, требующих быстрой, точной диагностики и расшифровки анализов для проведения адекватного лечения. В настоящее время обследование на наличие коккобациллы Bordettella pertussis не представляет сложности. Благодаря высокому уровню развития медицинских технологий многие заболевания, в том числе и коклюш, удается выявить на ранних стадиях и предотвратить осложнения, какие обычно наступают после несвоевременного выявления причин. В России, лечение коклюша входит в программу ОМС, и государство гарантирует необходимые обследования и терапевтические мероприятия.

Альтернативой ОМС может стать обращение в одну сетевых лабораторий, например, ИНВИТРО. Компания использует передовые методы исследований и на сегодняшний день является самой технологичной. Медицинские офисы, работающие под брендом ИНВИТРО, располагают лучшими специалистами, которые без проблем проведут забор материала, в том числе и у малышей. На вопрос: «Сколько стоит обследование?» – можно с уверенность ответить, что это не нанесет значимый урон семейному бюджету. Исследования проводятся в максимально сжатые сроки, а врач-консультант лаборатории ИНВИТРО досконально разъяснит целесообразность тех или иных анализов, ответит на все интересующие пациента вопросы и проведет расшифровку результатов. Также специалист ИНВИТРО обозначит стратегию лечения и подскажет, в каких клиниках могут предложить эффективное лечение.

Коклюш относится к детским острым инфекционным заболеваниям, так как им болеют в основном дети. Для данного заболевания характерны приступы спазматического судорожного кашля на фоне общего недомогания ребенка. Симптомы коклюша во многом схожи с признаками других болезней. Поэтому для того, чтобы дифференцировать это заболевание, необходимо сдать анализ на коклюш.

Источником заражения коклюшем бывает больной человек либо здоровый носитель бактерий возбудителей болезни. Особенно заразными являются больные в катаральном периоде (начальной стадии) заболевания. Инфекция передается воздушно-капельным путем. Восприимчивость к данному заболеванию достаточно высока – до 90%. В группе риска заражения коклюшем находятся дети дошкольного возраста.

Противококлюшные прививки, как и перенесенный ранее коклюш, не обеспечивают пожизненного иммунитета. Повторное заражение инфекцией вполне возможно. На взрослых людей приходится около 5% заражений коклюшем.

Инкубационный период данного заболевания обычно составляет 5–7 суток, хотя иногда может быть и 2–14 суток. К начальным симптомам коклюша относятся общее недомогание, насморк, небольшой кашель, незначительное повышение температуры тела. Затем кашель усиливается, ребенок становится раздражительным, капризным. Через 10–14 суток с момента начала заболевания наступает период спазматического кашля.

Особенностью кашля при коклюше являются судорожные серии кашлевых толчков, которые после глубокого свистящего вдоха переходят в короткие судорожные толчки. Количество таких циклов во время приступа может колебаться от 2 до 15. В конце приступа выделяется стекловидная вязкая мокрота, иногда возможна рвота. Во время приступа кашля лицо ребенка краснеет, шейные вены расширяются, изо рта высовывается язык, что часто приводит к травмированию уздечки языка. В некоторых случаях у малыша наступает остановка дыхания.

Продолжительность периода судорожного кашля составляет три–четыре недели. После этого количество приступов уменьшается, постепенно прекращаясь полностью. Но еще на протяжении двух–трех недель у больного наблюдается незначительный кашель.

У взрослых больных коклюшем отсутствуют приступы судорожного кашля, присутствует упорный кашель значительно меньшей интенсивности. При этом общее самочувствие взрослых остается нормальным, температура тела не повышается.

Паракоклюш – инфекционное острое заболевание, которое имеет сходные симптомы с коклюшем, но протекает более легко. В отличие от коклюша, при паракоклюше редко бывают осложнения.

Как видно, коклюш – достаточно тяжелое заболевание. Поэтому так важно провести его своевременную диагностику. Для этого врач обычно назначает анализ на коклюш и паракоклюш.

Где сдать анализ на коклюш? Данные исследования проводят лаборатории при диагностических центрах, клиниках. По направлению врача такие анализы проводят в лабораториях поликлиник по месту жительства или при инфекционных отделениях.

Существуют анализы крови на коклюш и бактериологические методы посева.

На ранней стадии заболевания достаточно информативным является такой бактериологический метод исследования, как посев на питательные среды. Долгое время для определения бактерии коклюша врачи применяли метод «кашлевых пластинок», который был предложен специалистом Мауритценом. Когда у ребенка начинается приступ кашля, на расстоянии 5–10 см от него размещают чашку Петри, содержащую питательную среду. Капельки слизи, которые содержат возбудителя коклюша, вылетают изо рта ребенка и оседают в чашке Петри. Через 2–4 суток ставят диагноз по выросшей культуре микроорганизмов. Данный анализ на коклюш и паракоклюш нельзя применить у маленьких деток и у тех малышей, у которых нет кашля.

Более современным является метод бактериологического посева материала из-под язычка и из носоглотки. Хотя такое исследование очень эффективно, его можно применять только в первые три–четыре недели после начала болезни. В более поздний период возбудитель коклюша не определяется.

К наиболее информативным анализам крови на коклюш относятся иммуноферментный анализ (ИФА) и серологический метод.

Иммуноферментный метод исследования крови заключается в определении антител специфического белка иммуноглобулина IgG и IgM к возбудителю коклюша. Для проведения данного анализа у пациента производят забор крови из вены. Иммуноферментный анализ можно проводить не ранее трех недель с начала болезни. Поэтому он обычно используется для подтверждения заболевания после бактериологического исследования.

Серологический метод анализа крови на коклюш состоит в исследовании крови пациента на титр (концентрацию) антител к палочке коклюша. Обычно определяют нарастание концентрации (титра) специфических антител при регулярных исследованиях.

Высокоинформативным анализом на коклюш является метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Данный метод молекулярной диагностики дает возможность выявить в биологическом материале (мазок из зева, носоглотки) фрагменты ДНК коклюшной палочки, и благодаря этому быстро и точно диагностировать коклюш. Специфичность данного метода исследования достигает 100%.

Какое именно исследование провести, где сдать анализ на коклюш, определяет врач. Вид необходимого обследования зависит от симптоматики и течения болезни, возраста больного.

источник

Коклюш — это бактериальная инфекция, вызываемая коккобациллой Bordetella pertussis. Для диагностики этого заболевания используются различные лабораторные исследования; правильный анализ на коклюш позволит определить не только наличие болезни, но и ее стадию.

Заподозрить коклюш следует при наличии у больного следующих симптомов:

  • кашель неясного происхождения продолжительностью более 2 недель;
  • приступы тяжелого кашля;
  • симптомы ОРВИ после контакта с больным.

Диагностика коклюша начинается с дифференциации его с острыми респираторными болезнями, гриппом, корью, обострением бронхиальной астмы, бронхоаденитом и попаданием в дыхательные пути инородного тела.

Дифференциальный диагноз основывается на следующих чертах похожих заболеваний:

  1. Грипп начинается остро, наблюдаются симптомы интоксикации (лихорадка, нейротоксикоз), которые преобладают над симптомами поражения верхних дыхательных путей.
  2. Корь отличается присутствием насморка, чихания, слезотечения, отечности слизистых оболочек наряду с кашлем, чего также не бывает при коклюше.
  3. ОРВИ, как и грипп, сопровождаются симптомами интоксикации и поражения слизистых. Разные вирусные инфекции могут характеризоваться воспалением глотки, признаками воспаления бронхов, отеком слизистых, конъюнктивитом.
  4. Туберкулез характеризуется схожими приступами сильного кашля. Для дифференциации болезней требуются рентгенография и реакция Манту.

При подозрении на коклюш для подтверждения диагноза используются различные лабораторные методы исследования. Основными являются ПЦР и бактериологический анализ на ранних сроках, серологическая диагностика — на поздних.

Общий анализ крови на коклюш позволяет определить состав крови и обнаружить наличие лейкоцитоза. Как и в случае других бактериальных заболеваний, при коклюше количество лейкоцитов на единицу крови возрастает, что свидетельствует об иммунном ответе на поражение возбудителем. Как правило, выделяют концентрацию лейкоцитов, равную 2–7*109/л.

Другие общие характеристики крови, как правило, не меняются; сдвиги наблюдаются только в катаральной стадии болезни. Скорость оседания эритроцитов может быть сниженной.

В большинстве случаев гематологическая лабораторная диагностика коклюша ограничивается общим анализом крови; для выявления возможных осложнений также может проводиться биохимическое исследование, дополняемое общим анализом мочи. Если болезнь протекает благоприятно, все показатели будут в норме.

Для дифференциации коклюша с астмой, гриппом и туберкулезом нужно сдать общий анализ мокроты.

Мокрота при нормальном течении болезни является слизистой; если болезнь осложнена пневмонией, к слизи добавляется гной.

Дополнительно может использоваться генетическое исследование — выделение ДНК возбудителя в мокроте при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР). На поздних стадиях болезни ПЦР неэффективен.

Бакпосев помогает определить заболевание у ребенка или взрослого в течение короткого периода после заражения — колонии возбудителя в питательной среде и температуре 36°С начинают появляться уже на 3–5 сутки.

Посев на коклюш делается на материале из носоглотки пациента — мокроте, слизи, собранном при кашле или искусственным путем.

Собирается материал с задней стенки глотки, через 2–3 ч после приема пищи. Применяется три метода сбора слизи:

  • «кашлевые пластинки» — больной кашляет на чашку Петри с питательным субстратом, на котором бациллы, попавшие из капель слизи, размножаются в течение 2–4 дней;
  • мазок из зева при помощи тампонов — ватные тампоны, смоченные в альгинате кальция, вводят через нос в носоглотку и оставляют на 10 с, после чего помещают в питательную среду;
  • сбор шприцем через тонкий назальный катетер.

Для бактериологического исследования на коклюш важен правильный выбор питательной среды, так как бацилла Bordetella pertussis размножается только в элективных средах. Вариантов три:

  1. Казеиново-угольный агар. Среда готовится из сухого субстрата, 5 г которого растворяется в 100 мл воды, после чего добавляется цефалексин в концентрации 40 мг/л. Смесь стерилизуется в автоклаве 30 мин при 110°C. Колонии бактерий образуются через 3–4 дня.
  2. Среда Борде-Жангу, используемая, если из-за тяжелого течения болезни анализ на коклюш требует сбора материала непосредственно у постели пациента. Готовится субстрат из 0,5 кг картофеля, 1 л воды и 40 мл глицерина.

  1. Молочно-кровяной агар Осиповой. Смешиваются 5% МПА, 1% хлорида натрия и такое же количество теплого обезжиренного молока. Смесь стерилизуется в автоклаве, фильтруется, после чего к ней добавляется 1/5 часть дефибринированной животной крови. Для исключения посторонней флоры добавляется 0,25–0,5 ед. пенициллина на 1 мл среды.

Следует учитывать, что колонии бактерий медленно развиваются — окончательный результат исследования может быть получен лишь на 5–7 сутки после посева. Этот анализ на коклюш эффективен только на ранних сроках заболевания. Из-за особенностей возбудителя окончательный диагноз на основании бактериологической диагностики ставится лишь в 15–25% случаев (данные по г. Санкт-Петербург).

На разных субстратах колонии возбудителя коклюша проявляются по-разному; важно знать их основные признаки, чтобы дифференцировать со схожими колониями бактерий паракоклюша.

КУА Мелкие, выпуклые колонии коккобактерий. Блестят, имеют гладкую текстуру и кремовый цвет. Более крупные размеры, окрашивают субстрат в коричневатый оттенок. Бактерии — палочки.
Борде-Жангу и агар Осиповой Гладкие, блестящие колонии коккобактерий. Прозрачные, имеют куполообразную форму и жемчужный оттенок. Окружены четкой гемолизной зоной. Крупные колонии палочек с коричневым цветом среды. Имеется зона слабого гемолиза.

Колонии коклюша нужно также отличать от бактерий септического бронхита. Последние, в отличие от кокков, растут на субстрате без изменения цвета среды и имеют уреазу.

Методы диагностики коклюша иногда включают микроскопическое исследование в качестве вспомогательного. Взрослые бактерии коклюша не имеют отличительных морфологических особенностей, но на ранних стадиях развития их можно определить.

На I фазе жизни бактерии имеют S-форму. Они грамотрицательны, отличаются мелкими размерами и однородностью.

Представляют собой палочки без спор с нежными капсулами. На II и III фазах бактерии превращаются в полиморфные или коккоидные формы жизни.

Поскольку прямые методы исследования (бактериологический и ПЦР) дают результаты только на ранних стадиях развития заболевания, при сроке более 3 недель от заражения используются серологические методы — анализы на антитела к коклюшу. Основная их цель — выявить наличие иммуноглобулинов IgM в крови и IgA в слизи.

Основные серологические методы исследования (РПГА, РА, РНГА) применяются также для эпидемиологического анализа. Диагностический титр при реакции пассивной гемагглютинации у непривитого ребенка, не перенесшего коклюш в прошлом — 1:80. У привитых и взрослых пациентов титры считаются диагностическими при нарастании в 4 раза.

Иммуноферментный анализ на иммуноглобулины IgM и IgA — это более современный метод анализа на коклюш у детей и взрослых.

Интерпретировать положительные (+) и отрицательные (-) результаты можно следующим образом:

коклюш не обнаружен
— или + — или + протекающее заболевание
+ — или + коклюш перенесен недавно
+ коклюш перенесен давно или была проведена иммунизация

Существует два метода анализа, позволяющие диагностировать коклюш в сжатые сроки:

  1. Иммунофлюоресцентный. Обнаруживает корпускулярные антигены в слизи на стенке глотки. Результат доступен уже через 2–6 ч.
  2. Латексная микроагглютинация. Выявляет антигены B. pertussis в течение 30–40 мин.

ПЦР также является быстрым методом анализа; его недостатком является невозможность применения на поздних сроках заболевания. Экспресс-диагностика коклюша у детей позволяет ускорить постановку диагноза и начало лечения, а также повысить процент лабораторных подтверждений коклюша.

Возбудителем коклюша является короткая неподвижная грамотрицательная палочка, которая называется Bordetella pertussis. Чаще всего она встречается у детей до пятилетнего возраста. Но иногда поражает дыхательные пути взрослых людей. Чтобы выявить истинную причину заболевания, необходимо сделать анализ на коклюш. Его производят несколькими способами в зависимости от стадии течения воспалительного процесса.

Палочка рода Бордетеллы передается воздушно-капельным путем, как и любая инфекция, провоцирующая грипп, ОРВИ или другие воспаления дыхательной системы. После ее проникновения в организм развивается коклюш, характеризирующийся циклическим течением с приступообразным судорожным кашлем.

Болезнетворный микроорганизм содержит экзотоксины и эндотоксины. Именно эти компоненты палочки Бордетеллы становятся опасными для организма больного, особенно, если заражение произошло у ребенка возрастом до пяти лет.

Как происходит развитие коклюша?

  1. Инфекция заселяет реснитчатый эпителий дыхательных путей (она не проникает в кровеносную систему и непосредственно внутрь клеток).
  2. Когда палочка погибает, образуется эндотоксин, провоцирующий спазматический кашель. Токсическое вещество усиливает воспаление, вызывает лимфоцитоз, гипогликемию.
  3. Кашлевой рефлекс сохраняется несколько недель. Сначала он характеризируется легким течением, но после закрепления в продолговатом мозгу раздражается блуждающий нерв, поэтому приступы усиливаются и учащаются.
  4. Сформировавшийся очаг возбуждения способен раздражать и другие подкорковые центры вегетативной системы. Именно поэтому при очередном кашлевом приступе у больного может возникнуть рвота, спазм сосудов и даже остановка дыхания.

Очень сложно выявить заболевание в первые недели после заражения, поскольку врачи направляют пациента на анализ крови на коклюш лишь при появлении симптомов патологического процесса.

А возбудитель Бордетелла сразу не вызывает характерных признаков интоксикации острых респираторных инфекций (высокая температура, насморк, кашель, озноб и др.).

Кульминация заболевания выявляется через 2-3 недели после начала циклического течения.

Опасность коклюша в том, что он способен провоцировать развитие осложнений:

  • Поражение бронхолегочных отделов дыхательной системы;
  • Заболевания сердечно-сосудистой системы (кровоизлияния, легочное сердце);
  • Энцефалопатия;
  • Пневмония.

Именно поэтому очень важно как можно раньше сделать анализ крови на коклюш и начать его лечение. Таким образом, удастся избежать осложнений.

  1. Инкубационный (от трех до четырнадцати дней).
  2. Катаральный (около двух недель).
  3. Судорожный или спазматический.
  4. Обратное развитие (в среднем длится от двух до 12 недель).

Уже на стадии катарального течения можно сделать анализ на выявление палочки Бордетеллы. В этот период начинает беспокоить сухой навязчивый кашель без повышения температуры. Кашлевые толчки усиливаются к вечеру и не проходят даже после приема противокашлевых препаратов. Других симптомов заболевания не отмечается.

В катаральный период течения коклюша расшифровка анализа периферической крови поможет определить лейкоцитоз, то есть, значительное повышение лейкоцитов. Обычно показатели поднимаются до 15-40*109/л. При этом скорость оседания эритроцитов (СОЭ) остается в норме.

При наступлении судорожного периода все симптомы коклюша станут очевидными. Характерным признаком являются частые кашлевые толчки со свистящим вдохом (реприз). Цикличность кашля повторяется в среднем от 2 до 15 раз. При тяжелом течении у пациентов период может насчитывать 50 циклов.

При этом, внешний вид больного не оставляет сомнений, что у него коклюш:

  • Глаза наливаются кровью;
  • Лицо краснеет или приобретает синюшный оттенок;
  • Язык выталкивается из ротовой полости и свисает с загнутым вверх кончиком;
  • Венозные сосуды головы набухают;
  • После приступа выделяется вязкая мокрота, может возникать рвота.

В период обратного развития симптоматика ослабляется и через некоторое время исчезает.

Для бакпосева делают забор слизи из задней стенки глотки. Процедура должна осуществляться утром натощак или же через 2-3 часа после приема пищи. Также могут применять метод «кашлевых пластинок» для изучения выделившихся капель мокроты. Но он малоэффективен при заборе отделяемой слизи у деток, которые «плохо» кашляют.

Бактериологический посев производят на казеиново-угольный агар. Результат диагностики после прорастания микроорганизма получают через 3-7 суток. Такой анализ будет информативным, если взять забор слизи у пациента, кашляющего не более месяца. Дальше возбудитель не выделяется.

Также расшифровка будет ложной, если пациент принимает антибиотики. Бакпосев помогает отличить коклюш от туберкулеза, бронхиальной астмы, ОРВИ, пневмонии.

Заключается в исследовании сыворотки человеческой крови на наличие антител или иммуноглобулинов IgM (на раннем сроке) и IgG (на позднем сроке) к антигенам коклюшного микроба. Наиболее достоверный лабораторный метод – это иммуноферментный анализ (ИФА). Он позволяет не только определить болезнетворного возбудителя, но и понять, на какой стадии находится болезнь по количеству антител.

Серологическая диагностика коклюша эффективна, потому что после проникновения инфекции в организме человека сразу же вырабатываются иммунные защитные комплексы. В сыворотку крови лаборант добавляет антиген заболевания и после химических реакций выдает результат.

Расшифровка анализа крови на коклюш серологическим методом показывает, есть ли в сыворотке пациента антитела к палочке Бордетелла.

Повышение титра IgG или IgM в четыре раза подтверждает диагноз острого течения болезни. Слабое увеличение титра может свидетельствовать о перенесенном ранее коклюше, о недавней вакцинации АКДС.

Показатель «0» — это норма и говорит об отсутствии анаэробной инфекции.

Читайте также:  Кровь на анализы при профосмотре

Иммуноферментный анализ крови сдают дважды. Первый раз для выявления болезнетворного возбудителя. А второй – чтобы понять, насколько динамично развивается воспалительный процесс.

Очень часто для диагностики коклюша используют иммунофлюоресцентный способ обследования (РНИФ) отделяемого со стенки глотки. Он обнаруживает антитела за 2-6 часов.

Латексная микроагглютинация (ЛМА) – это очень быстрый диагностический способ выявить возбудителя коклюша. Процедура длится всего 30-40 минут.

Нередко анализы на коклюш у детей и взрослых на раннем сроке заболевания проводят с помощью ПЦР – полимеразная цепная реакция. Он основан на выявлении ДНК палочки Бордетеллы, поэтому в 100% случаев определяет, есть ли возбудитель в организме или его нет.

ПЦР является информативной диагностической процедурой, поскольку она не зависит от реакции организма на инфекцию, как при ИФА. Молекулярный метод выявляет конкретного микроба даже в инкубационный период, когда еще нет никаких симптомов заболевания. А при коклюше, с продолжительным сроком «тихого» развития, он как раз будет идеальным лабораторным исследованием.

Но для получения точного результата анализа и его расшифровки необходимо сохранить чистоту биологического материала.

Если на образец случайно попадет чужой фрагмент ДНК палочки коклюша (из воздуха или каких-то других предметов), то может возникнуть «ложное срабатывание».

А отсутствие инфекции по показателям анализа при явных симптомах заболевания случается, если материал взят неправильно (мазок не из зева или носоглотки).

  1. За день до сдачи анализа рекомендовано соблюдать диету – снизить потребление жирной пищи, сладостей, алкогольных напитков. Желательно исключить стрессовые ситуации и серьезные физические нагрузки.
  2. Забор крови производится натощак утром из локтевой вены (у детей 5 мл, у взрослых до 10 мл). Воду пить разрешено. От последнего приема ужина отсчитывают минимум 8 часов.
  3. Повторное обследование нужно пройти спустя две недели после первой серологической диагностики.
  4. Если больной принимает медикаменты, включая антибиотики, он должен рассказать название и дозировку доктору.

В основном перед забором анализов в лаборатории сотрудники предупреждают о том, как правильно сдавать кровь. В профессиональных учреждениях есть свои сайты, где указано, каких правил нужно придерживаться перед приходом к лаборанту. В Инвитро и других крупных медицинских компаниях результаты анализов максимально точные, главное, соблюдать указания врача, чтобы не исказить полученные данные.

В расшифровке серологической диагностики показывают, какой должна быть норма показателей крови.

Если в анализе пациента содержится значительное количество антител, которое при повторном обследовании увеличивается, значит, диагноз коклюш подтверждается.

Незначительное повышение уровня иммуноглобулинов или антител может говорить о сформировавшемся иммунитете к перенесенному инфекционному заболеванию.

Если пациента направляют на неспецифический гематологический анализ крови с пальца, тогда специальной подготовки не требуется. Главное условие – проводить забор натощак утром. Если по результатам анализа в крови повышенное количество лейкоцитов и нейтрофилов, но СОЭ в норме, то такие изменения характерны для коклюша.

Если при сдаче анализа крови существует не так много ограничений, то для проведения бакпосева или молекулярного способа диагностики очень важно получить чистый биологический материал без примесей каких-либо добавок (пищевых, лекарственных и др.). Также большое значение имеет профессионализм лаборанта, который будет брать мазок слизи из зева или носоглотки. Если забор производится не из того места, где сосредоточен инфекционный возбудитель, результат анализа будет ложным.

Перед сдачей слизистого отделяемого из ротоглотки нужно придерживаться следующих правил:

  • Не принимать пищу или спиртных напитков в течение четырех часов до посещения лаборатории;
  • Запрещено чистить зубы натощак, иначе образец материала будет смыт или испорчен;
  • Не принимать лекарственных средств перед сдачей анализа;
  • Рекомендовано только прополоскать рот обычной кипяченой водой без добавок.

В настоящее время есть множество различных государственных или частных медучреждений, которые предлагают лабораторную диагностику различных возбудителей.

Можно воспользоваться бесплатным проведением анализов в поликлинике по месту жительства или прибегнуть к услугам комфортных лабораторий, где есть все необходимые реагенты и материалы, чтобы получить максимально точные результаты диагностики.

Цена таких исследований на наличие возбудителя коклюша зависит от выбранного медучреждения.

В профессиональных частных лабораториях результаты анализов выдают с расшифровкой. Пациент самостоятельно может понять, какие у него показатели – в норме или свидетельствуют о наличии инфекционного агента. После этого врач, если потребуется, назначит эффективное лечение или направит на дополнительное обследование.

Коклюш – острое инфекционное заболевание органов дыхания, основным проявлением которого является длительный приступообразный кашель. Болеют коклюшем люди любого возраста – у кого нет достаточного иммунитета после вакцинации, тот в зоне риска.

Однако тяжелее всего переносят недуг маленькие дети, у них часто возникают осложнения со стороны нервной системы, расстройства дыхания и кровообращения.

Своевременная диагностика коклюша в большинстве случаев позволяет избежать затягивания болезни и развития осложнений.

1. Почему важно своевременно диагностировать коклюш 2. В каких случаях показано обследование на коклюш 3.

Анализы при подозрении на коклюш – Бактериологический анализ отделяемого глотки на коклюш – Выявление возбудителя коклюша методом ПЦР – Определение концентрации специфических антител в крови – Общий анализ крови при коклюше 4. Стоимость анализов на коклюш 5. Где можно сдать анализы на коклюш

Для этого перед походом в лабораторию обследуемый не должен чистить зубы, кушать, пить, полоскать рот и горло. Если это условие нарушено, сдавать материал можно будет не ранее чем через 2-3 часа.

  1. Выделения для анализа на коклюш забирают специальным тампоном с задней стенки глотки в инфекционной больнице или прямо в лаборатории.
  2. Далее материал сеют на питательные среды, в которых хорошо растет и размножается возбудитель коклюша.
  3. Есть еще один метод забора слизи для исследования – открытую чашку с питательной средой подносят непосредственно ко рту обследуемого во время кашлевого приступа.

Предварительный результат бактериологического анализа можно получить уже на 2-3 день после посева, а заключительный – только через 5-7 суток. Bordetella pertussis на искусственных средах растет достаточно медленно, поэтому бактериологом необходимо время для точной идентификации микроорганизмов.

  • Материалом для данного исследования служит соскоб с задней стенки глотки.
  • Эффективность метода ПЦР в диагностике коклюша является самой высокой (около 80%), ложноотрицательные результаты встречаются редко.
  • Проводится такой анализ в первые 3-4 недели заболевания, то есть когда в слизистой дыхательных путей еще присутствуетBordetella pertussis.
  • Особенности подготовки: нельзя чистить зубы, кушать и пить минимум за 2-3 часа до исследования, непосредственно перед взятием материала можно пополоскать рот кипяченой водой.

Серологическое исследование применяется для диагностики коклюшной инфекции на поздних сроках ее развития – приблизительно с 3 недели заболевания.

В это время описанные выше методы оказываются малоэффективными, поскольку возбудителя в дыхательных путях уже нет, а сохранение кашля связано с остаточными воспалительными явлениями и перевозбуждением кашлевого центра в головном мозге.

В ходе серологической диагностики коклюша определяют титры антител к антигенам Bordetella pertussis трех классов:

  • иммуноглобулины М – появляются на 2 недели заболевания;
  • иммуноглобулины А – синтезируются с 2-3 недели;
  • иммуноглобулины G – обнаруживаются только после 3 недели недуга.

Основным методом серологической диагностики коклюша является иммуноферментный анализ (ИФА). Исследуемый материал – венозная кровь.

Подготовка к сдаче крови должна быть такой же, как и перед другими анализами: приходить в лабораторию необходимо утром натощак, за 12 часов до исследования желательно исключить физические нагрузки и не принимать лекарственные средства, если это возможно.

Особенностью серологической диагностики коклюша является необходимость в исследовании парных сывороток, то есть проведении двух анализов с промежутком в 10-14 дней. Такая тактика дает возможность выявить нарастание титров антител, которое говорит в пользу развивающегося заболевания, а не иммунитета, приобретенного вследствие ранее перенесенного коклюша или вакцинации.

Согласно рекомендациям ВОЗ подтверждением наличия коклюша у невакцинированных от этой инфекции детей является нарастание уровня антител Ig М и Ig А к одному или нескольким антигенам Bordetella pertussis. Для оптимальной лабораторной диагностики одновременно должны использоваться два метода исследования: бактериологический посев и серологический анализ крови.

  • Данный метод исследования не является специфическим и не может подтвердить или опровергнуть диагноз «Коклюш».
  • Единственное предназначение этого анализа – выявление воспалительного процесса и коррекция плана дальнейшего обследования.
  • Врач может заподозрить коклюш при наличии у пациента соответствующей клинической картины и высокого лимфоцитоза и лейкоцитоза в результате общего анализа крови.

В частных клиниках и лабораториях бактериологическое исследование на коклюш стоит в среднем 1,5 тыс. рублей. Определение титра антител к коклюшу обойдется по 750-800 рублей за каждый иммуноглобулин.

Приблизительно такая же цена и у анализа глоточного соскоба на коклюш методом ПЦР.

Дополнительно оплачивается услуга по забору материала: мазки и соскобы – 300-400 рублей, взятие венозной крови – 100-150 рублей.

Коклюш – острая антропонозная инфекционная болезнь с воздушно-капельным механизмом передачи возбудителя, вызываемая коклюшным микробом и характеризующаяся длительным своеобразным спазматическим кашлем с поражением дыхательной, сердечно-сосудистой и нервной систем. Возбудитель коклюша – Bordetella pertussis – грамотрицательная коккобацилла, относится к роду Bordetella. Помимо B. pertussis респираторные инфекции у людей могут вызывать B.parapertussis и B.bronchiseptica.

B.parapertussis вызывает паракоклюш – заболевание, подобное коклюшу, но с более легким течением. Перекрестный иммунитет в отношении коклюша и паракоклюша отсутствует. B.

bronchiseptica вызывает бронхисептикоз (бордетеллез), протекающий как ОРВИ, возникающий при контакте с инфицированным животным, у людей с ослабленной иммунной системой может вызывать пневмонию. Выделяют типичные (кашель имеет приступообразный характер) и атипичные (отсутствует спастический кашель) формы коклюша.

В течении типичных форм коклюша различают 4 периода: инкубационный (в среднем 14 дней), катаральный (1–2 недели), период спазматического кашля (4–6 недель) и период разрешения.

Выраженность клинических проявлений зависит от тяжести заболевания, оцениваемой по: длительности катарального периода, частоте приступов кашля, наличию цианоза лица при кашле, гипоксии вне приступов кашля, степени нарушения работы сердечно-сосудистой системы, наличию и степени выраженности энцефалических расстройств.

Диагноз коклюша считается подтвержденным, если имеется соответствие клиническому стандартному определению случая коклюша, лабораторное подтверждение и/или имеется эпидемиологическая связь с лабораторно подтвержденным случаем. Возможно сочетанное инфицирование с другими возбудителями ОРЗ, что отягощает течение болезни.

Показания к обследованию. Диагностика: больные с подозрением на коклюш и паракоклюш (в соответствии со стандартным определением случая*), а также длительно (5–7 дней и более) кашляющих, независимо от указаний на контакт с больными.

По эпидемическим показаниям: дети и взрослые в детских учреждениях, родильных отделениях и детских больницах, в которых были выявлены больные коклюшем.

  • Острые бронхиты, вызванные Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae, вирусными возбудителями респираторных инфекций;
  • аспирация инородного тела;
  • муковисцидоз;
  • лимфогранулематоз.

Материал для исследований

  • Заднеглоточный мазок – культуральное исследование;
  • носоглоточный мазок – культуральное исследование;
  • мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки – выявление ДНК микроорганизмов;
  • гортанно-глоточные смывы – обнаружение АГ;
  • сыворотка крови – обнаружение АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение чистой культуры бордетелл и определение их видовой принадлежности; выявление ДНК B.pertussis, B.parapertussis, B.Bronchiseptica методом ПЦР, выявление АГ B. pertussis в гортанно-глоточных смывах с использованием РНИФ; обнаружение специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. При выявлении бордетелл выполняют выделение чистой культуры микроорганизмов и определение их видовой принадлежности методами микроскопии, постановкой РА с видоспецифическими сыворотками, проведением биохимических тестов и оценкой подвижности микроба.

Культуральный метод характеризуются большой продолжительностью исследования, его диагностическая чувствительность не превышает 10–20%; аналитические характеристики во многом зависят от качества используемых сред (добавление крови животных является обязательным условием) и реагентов для иммунологических и биохимических идентификационных тестов.

Обнаружение ДНК методом ПЦР наиболее эффективно и востребовано для ранней диагностики, наибольшими диагностическими возможностями обладают методики, позволяющие обнаруживать и дифференцировать значимые для человека виды Bordetella с чувствительностью 5 x 102 – 1 x 103 ГЭ/мл исследуемого материала со специфичностью 100%.

Выявление АТ позволяет диагностировать коклюш на поздних сроках. Обнаружение специфических АТ проводят с использованием: РА для диагностики коклюша и паракоклюша, ИФА для обнаружения АТ (Ig M, A, G) к различным антигенам B.pertussis и B.parapertussis.

Выявление специфических IgА методом РНИФ практически не используется по причине отсутствия стандартизации; чувствительность анализа, по данным авторов метода, варьирует в широком диапазоне от 103 до 105 микробных клеток в 1 мл, при этом положительные результаты исследования можно учитывать только при наличии типичной симптоматики коклюша.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Культуральное исследование с диагностической целью следует проводить в ранние сроки заболевания (1–2 недели болезни); в более поздние сроки высеваемость возбудителя резко снижается. Оптимальное время для обнаружения ДНК методом ПЦР – до 3-х недель от начала заболевания.

Определение АТ целесообразно с 3-й по 6-ю недели от начала заболевания, далее титры АТ начинают снижаться.

У детей до 6 лет, вакцинированных против коклюша, можно использовать только пробы крови, взятые в динамике (парные сыворотки), причем первый раз кровь берется не ранее чем через 3 недели от начала заболевания, повторно – спустя 2 недели.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Диагноз коклюша считается лабораторно подтвержденным в случае выделения культуры B.pertussis; обнаружения специфического фрагмента генома B.

pertussis методом ПЦР; выраженной сероконверсии (увеличение в 4 и более раз уровня специфических IgG и/или IgA в парных сыворотках, или обнаружении у не привитого пациента специфических IgM). Диагностическим титром реакции агглютинации у не привитых и не болевших детей считают разведение 1:80.

Необходимо учитывать, что у детей в возрасте до 3 месяцев могут присутствовать материнские АТ, но, как правило, в низких титрах. Диагноз коклюш, вызванный B.parapertussis, ставится в случае выделения культуры B.parapertussis или обнаружения специфического фрагмента генома B.

parapertussis методом ПЦР, или при обнаружении АТ методом РА в титре не менее 1:80. Заболевание, вызванное B.bronchiseptica, диагностируется при выделении культуры или обнаружения специфического фрагмента генома методом ПЦР.

Стандартное определение случая заболевания коклюшем – острое заболевание, характеризующееся: сухим кашлем с постепенным его усилением и приобретением характера приступообразного спазматического на 2-3 неделе заболевания, особенно в ночное время суток или после физической и эмоциональной нагрузки; явлениями апноэ, гиперемией лица, цианозом, слезотечением, рвотой, лейко- и лимфоцитозом в периферической крови, развитием «коклюшного легкого», жестким дыханием, отделением вязкой мокроты; незначительным повышением температуры.

  • Комплексное исследование, направленное на диагностику коклюша и паракоклюша, а также на оценку эффективности вакцинации против коклюша.
  • Синонимы русские
  • Возбудители коклюша, паракоклюша; комплексное обследование.
  • Синонимыанглийские
  • Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis; comprehensive examination.
  • Какой биоматериал можно использовать для исследования?
  • Венозную кровь, мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию. Возбудитель – Bordetella pertussis (палочка Борде — Жонгу), мелкая неподвижная грамотрицательная коккобацилла, строгий аэроб. Инфекция передается воздушно-капельным путём. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса.

В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный период (длительностью от нескольких дней до двух недель), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (2-8 недель), разрешения (2-4 недели) и реконвалесценции (2-6 месяцев).

Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, лихорадка, слабость, в гемограмме – лейкоцитоз, лимфоцитоз.

Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста, возможно развитие осложнений со стороны бронхолегочной и нервной систем. У взрослых и лиц после вакцинации коклюш чаще протекает в легкой, атипичной форме, как правило, без осложнений.

Паракоклюш – это острая бактериальная инфекция респираторного тракта, поражающая детей и взрослых. Возбудителем инфекции является аэробная палочка Bordetella parapertussis. Клинические проявления данного заболевания схожи с картиной коклюша, характерна более стертая смена периодов, легкое течение, редкое развитие осложнений, преимущественно у детей.

Диагностика коклюша и паракоклюша основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами.

В клинической лабораторной диагностике данных заболеваний применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителей коклюша/паракоклюша; серологический метод, направленный на определение суммарных антител к данным возбудителям; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – для выявления генетического материала возбудителя коклюша.

Бактериологическое обследование является первым этапом диагностики, но позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, в первые 2-3 недели.

Метод ПЦР является высокоэффективным в диагностике коклюша, позволяет выявлять фрагменты ДНК возбудителя B. pertussis в исследуемом биоматериале, обладает высокой диагностической специфичностью, достигающей 100 %.

Использование данного метода рекомендовано в первые три недели от начала клинических проявлений заболевания, то есть в катаральный и ранний пароксизмальный период. В более поздние сроки заболевания диагностическая чувствительность метода падает.

Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов ПЦР эффективна на фоне лечения антибактериальными препаратами. Также она используется при обследовании детей раннего возраста, в отличие от более старших детей и взрослых, когда возможно возрастание числа ложноположительных результатов.

У лиц, вакцинированных против коклюша, положительный результат данного метода может свидетельствовать о транзиторном носительстве патогена, а не об активной форме заболевания.

Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. pertussis и B. parapertussis. Они могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клинический период заболевания, возраст пациента и наличие предшествующей вакцинации. Для подтверждения диагноза необходимо определение нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней.

Реакцию ставят параллельно с коклюшным и паракоклюшным антигеном. Серологическое обследование рекомендовано применять в период 3-6 недель от начала первых клинических симптомов заболевания, характеризующий пароксизмальный период коклюша.

Данный метод не рекомендуется применять детям до 3 месяцев, так как иммунная система новорождённых в это время ещё незрелая и могут быть обнаружены материнские антитела в низких титрах.

Также не рекомендуется проводить серологическое исследование лицам в течение 1 года после вакцинации против коклюша вследствие невозможности различить иммунный ответ на вакцинацию или на первичную инфекцию. Титр антител к B. pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки против коклюша у детей.

Для чего используется исследование?

  • Для комплексной лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша.
  • Для диагностики коклюша в первые три недели от начала заболевания, характеризующие катаральный и ранний пароксизмальный период, а также на фоне лечения антибактериальными препаратами.
  • Для диагностики коклюша и паракоклюша в спазматический (пароксизмальный) период заболевания.
  • Для оценки эффективности вакцинации против коклюша.

Когда назначается исследование?

  • При клинических проявлениях коклюша/паракоклюша: сухой спастический кашель, сопровождающийся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом носогубного треугольника, акроцианоз, лихорадка, слабость, насморк, слезотечение.
  • При обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными коклюшем/паракоклюшем.
  • При оценке эффективности вакцинации против коклюша.

источник