Хранение крови для генетического анализа

1. Заказчик производит забор биологического материала для исследования, руководствуясь следующими обязательными правилами.

Для выделения ДНК и проведения процедур ДНК-диагностики подходят следующие виды биологических материалов: кровь, букальный эпителий, слюна, сперма, ворсины хориона и амниотическая жидкость, образцы различных органов и тканей, содержащих целые клетки с неразрушенными ядрами. Можно использовать пятна крови, нанесенные на пористую поверхность, а также трупный и эксгумированный материал. Однако, чаще всего источником ДНК служат клетки крови и плодный материал. Все остальные образцы передаются на анализ только после специальной договоренности с Исполнителем:

Правила забора крови — Для исследования должна быть предоставлена венозная кровь в объеме 4 — 8 мл. Забор крови осуществляется в вакутейнеры (специальные пробирки, содержащие антикоагулянт). В качестве антикоагулянта используют 0,5М раствор ЭДТА, рН 8,0. Соотношение объема ЭДТА к объему крови не должно превышать 1:10. Допускается использование раствора цитрата натрия или других антикоагулянтов кроме гепарина. Использование гепарина недопустимо! После забора крови пробирка должна быть плавно несколько раз перевернута вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом. (NB! В противном случае кровь свернется и выделение ДНК из нее станет невозможным!) На пробирке на специальной клейкой ленте или полоске пластыря пишущей ручкой должна быть разборчиво написана фамилия, инициалы и статус того, чья кровь находится в данной пробирке (например, Иванов И.И., отец больного). К пробирке обязательно должно быть приложено направление, в котором четко указывается фамилия больного, диагноз, кем и откуда направлен в _______________________________________________________________________, а также нарисована родословная и указаны фамилии всех членов семьи, у которых был осуществлен забор крови.

Правила забора образцов букального эпителия – При взятии данных образцов при помощи специального одноразового инструмента (палочки) проводится соскоб эпителиальных клеток с внутренней поверхности щеки. При самостоятельном заборе образцов букального эпителия нужно действовать следующим образом:

Приобрести стандартные гигиенические ватные палочки. Внимание! Использовать только новую, не вскрывавшуюся ранее упаковку!

Клиент, у которого будет производиться забор образцов, должен прополоскать рот чистой кипяченой водой.

Взять ватную палочку за один конец и провести несколько раз другим концом палочки по внутренней поверхности щеки с легким нажимом.

Отрезать и выбросить конец палочки, за который держались рукой.

Оставшуюся половину палочки высушить на чистом листе бумаги при комнатной температуре.

От каждого клиента необходимо предоставить не меньше трех ватных палочек с образцами букального эпителия. Хранить и транспортировать образцы в бумажных конвертах при комнатной температуре. Образцы от разных клиентов должны быть в отдельных конвертах для исключения взаимного переноса биологического материала. Хранить и транспортировать образцы в бумажных конвертах при комнатной температуре. Образцы от разных людей должны быть в отдельных конвертах для исключения взаимного переноса биологического материала.

Правила предоставления плодного материала – в качестве плодного материала для проведения пренатальной диагностики используют либо биоптат хориона (при сроке беременности от 8 до 14 недель), либо амниотическую жидкость (на сроке от 15 до 24 недель). Биоптат ворсин хориона, помещенный в специальную среду, должен представлять собой видимый глазом кусочек ткани, отмытый от материнской крови и отделенный от материнской части ворсин. В противном случае, заражение плодного материала материнским не позволит правильно провести анализ. Флакон с плодным материалом должен быть подписан фамилией матери, у которой произведена пункция. К нему также необходимо приложить направление, в котором четко указать фамилию больного, диагноз, кем и откуда направлен в _______________________________________________, а также нарисовать родословную и указать фамилии всех членов семьи, у которых был осуществлен забор материала.

Правила оформления биологических образцов по установлению биологического родства (определению отцовства) по личному желанию граждан.

Для анализа должна быть предоставлена венозная или капиллярная кровь, букальный эпителий (См. правила забора крови, букального эпителия). Необходимо выслать в адрес Исполнителя опечатанные образцы крови и Акт взятия образцов биологического материала (Приложение № Б) с указанием лиц, осуществивших забор материала, а также копии паспортов родителей и свидетельства о рождении ребенка.

2. Исполнитель обязан немедленно информировать Заказчика о непригодности или недоброкачественного представленного биологического материала. Заказчик обязуется предоставить новый образец биологического материала для исследования в кратчайший срок. При этом срок выполнения работ будет исчисляться с момента предоставления нового образца для исследования.

3. Настоящее Приложение является на период его действия неотъемлемой частью Договора № ___ от «__» _________________20____ года.

источник

Рак молочной железы (РМЖ) – самое распространенное из всех онкозаболеваний у женщин. По статистике, одна из девяти женщин заболевает раком молочной железы в течение жизни. Около 10% всех случаев РМЖ — это наследственная форма рака, обусловленная наследуемыми мутациями (необратимыми изменениями) в генах.

На сегодняшний день известен ряд генов, наследуемые мутации в которых приводят к возникновению семейных форм РМЖ и рака яичников. Наиболее изученными среди них являются гены BRCA1 и BRCA2. В организме человека белки, кодируемые этими генами: восстанавливают целостность поврежденных молекул ДНК, нормализуют баланс эстрогенов, тормозят деление пораженных клеток, препятствуют метастазированию. В результате мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 происходит повреждение клетки, вследствие чего активизируются процессы бесконтрольного деления, что и приводит к возникновению раковой опухоли.

Наличие мутаций в этих генах не означает, что обязательно разовьется рак молочной железы, но этот риск в течение жизни по некоторым данным приближается к 90% (!).

Ген CHEK2 кодирует протеинкиназу, активирующуюся в ответ на повреждение молекулы ДНК. Данный опухолевый супрессор контролирует вход клетки в митоз, репарацию ДНК. Наследственная мутация 1100delC приводит к синтезу неполноценного укороченного белка CHEK2. Мутация 1100delC в гене CHEK2 приводит к увеличению риска развития рака молочной железы в 2 – 10 раз. Мутация CHEK2 1100delC также ассоциирована с повышенным риском опухолей других локализаций (яичника, простаты, толстой кишки, желудка) и может встречаться в «раковых семьях» с отсутствием генетических дефектов генов BRCA1 и BRCA2.

Выявление мутаций в генах BRCA1, BRCA2, CHEK2 крайне важно и для тех пациенток, у которых диагноз РМЖ уже установлен. Зная факт наличия мутации, можно выбрать оптимальное лечение уже в первой линии химиотерапии. Этот анализ позволяет назначить эффективный противоопухолевый препарат: у носителей мутаций чувствительность к различным противоопухолевым препаратам отличается от таковой у лиц с отсутствием мутаций.

Наборы реактивов для выявления мутаций в генах BRCA1, BRCA2 и CHEK2

Регистрационное удостоверение № ФСР 2012/13492.

Наборы реактивов Real-time-PCR-BRCA1-5382insC, Real-time-PCR-BRCA1-T300G, Real-time-PCR-BRCA1-185delAG, Real-time-PCR-BRCA1-4153delA, Real-time-PCR-BRCA2-6174delT, Real-time-PCR-CHEK2-1100delC предназначены для выявления мутаций, связанных с наследственными формами рака молочной железы и яичников.

Наборы предназначены для клинической диагностики in vitro.

Характеристики наборов

Наборы содержат достаточное количество реагентов для проведения 50 реакций. Наборы оптимизированы для использования с амплификатором для проведения ПЦР в режиме реального времени “CFX96” (Bio-Rad, США). Использование других приборов возможно, но может потребовать изменения параметров ПЦР и повлиять на чувствительность метода.

Материал для исследования

В качестве материала для анализа используется геномная ДНК человека. Рекомендуемое количество ДНК для проведения одной реакции составляет 10-100 нг. При выделении ДНК рекомендуем использовать набор для выделения ДНК из цельной крови («Blood DNA Kit», Кат.№ 31601, 31602). При использовании других технологий выделения ДНК рекомендуем работать с количествами ДНК, по крайней мере, в 4 раза превышающими минимально возможные.

Минимальное количество ДНК, необходимое для реакции, – 2 нг. Максимальное количество ДНК, которое может быть использовано для 1 реакции, – 1000 нг.

Состав набора

Набор содержит реактивы достаточные для проведения 50 реакций с образцами ДНК и контролями. Набор состоит из пробирок с реагентами с цветными крышками и инструкции по применению.

Условия хранения

Хранить в темноте при -18С в течение 12 месяцев.

Принцип действия наборов реактивов

Образец является отрицательным (без мутации), если при использовании смеси праймеров для детекции ДНК гена дикого типа появляется кривая амплификации, которая пересекает порог флуоресценции не позднее 35 цикла, а кривая ампли-фикации при использовании смеси праймеров для детекции ДНК гена с мутацией отсутствует или появляется не ранее чем через 6 циклов после кривой амплификации ДНК гена дикого типа.

Образец является положительным (содержащим мутацию), если при использовании смесей праймеров для детекции ДНК гена дикого типа и ДНК гена с мутацией появляются кривые амплификации, пересекающие порог флуоресценции с разницей не более 2 циклов (в идеальном случае одна кривая должна накладываться на другую).

Скачать каталог нашей продукции

Читать также:

Наборы реактивов для детекции соматических мутаций Подробнее…

Наборы реактивов для избирательного обогащения ампликонов ДНК Подробнее…

Наборы реактивов для выделения ДНК Подробнее…

Связаться с нами с помощью контактной формы:

Статистика заболеваемости РМЖ и раком яичников

Рак молочной железы — самый часто встречающийся вид онкологических заболеваний у женщин. Каждая девятая женщина в мире заболевает раком молочной железы в течение жизни. Около 10% всех случаев рака молочной железы — это семейные формы, при которых заболевают кровные родственники внутри одной семьи. У всех родственников в семье, имеющих мутацию в определенных генах, повышается риск развития онкологического заболевания — это может быть как рак молочной железы, так и рак яичников. Этот риск в течение жизни по некоторым данным приближается к 90%.

10% всех случаев рака молочной железы — это семейные формы, при которых заболевают кровные родственники внутри одной семьи

Таким образом, среди совершенно здоровых людей можно выделить группу лиц — носителей мутаций, у которых рак молочной железы или рак яичников в течение жизни разовьется с вероятностью до 90%.

Недавние исследования показали, что в России на 1000 человек приходятся как минимум 6 человек — носителей мутаций. Среди больных раком молочной железы более 30 человек на 1000 — носители таких мутаций, среди больных раком яичников более 150 человек на 1000 — носители мутаций. Мутации подобного рода не проявляются в повседневной жизни, выявить их можно только с помощью молекулярно-генетического анализа. Анализ подобного рода надо сделать всего один раз в жизни — по сути, этот анализ позволяет ответить на вопрос: передали ли мои родители мне гены с опасными мутациями? Если ответ положительный — такой анализ должен быть сделан всем кровным родственникам носителя мутаций.

Невозможно назвать точную дату появления злокачественной опухоли у носителей мутаций, однако такие люди должны сделать все, чтобы обнаружить опухоль на самой ранней стадии. Раннее выявление и удаление опухоли предотвращает образование метастазов, делает операцию менее травматичной для больного, позволяет вовремя начать эффективное лечение самыми современными препаратами. По данным статистики, более чем в 95% случаев своевременное выявление опухолей молочной железы позволяет пациенткам избежать тяжелых последствий и вести полноценную жизнь.

В чем смысл подобной диагностики?

Обнаружение мутации позволяет предпринять целый ряд профилактических мер, направленных на предотвращение или на максимально раннюю диагностику заболевания. Из них главным является постоянное диспансерное наблюдение врача-онколога. Это наблюдение позволит диагностировать опухоль на ранних стадиях ее развития, когда сам пациент в силу бессимптомного течения заболевания не знает о его начале.

Кто должен пройти процедуру анализа?

Согласно большинству международных рекомендаций, проведение подобного анализа обязательно для больных раком молочной железы и больных раком яичников у которых:

Учитывая высокую частоту встречаемости мутаций в России, анализ крайне желателен для всех больных раком молочной железы и особенно раком яичников. Выявление мутации у онкологических больных поможет выбрать более корректное лечение для таких больных. Кроме того, выявление мутации у больной позволяет технологически просто провести анализ наличия этой же мутации у родственников больной, обнаружить здоровых носителей мутации в семье пациентки. Проведение такого анализа вполне обосновано и для совершенно здоровых людей — случайное выявление мутации вполне вероятно.

Материал исследования

Для проведения анализа необходим 0,5 — 1 мл крови, кровь должна быть собрана в пробирку с ЭДТА, может храниться при — 20°С долгое время до проведения анализа.

Какие методы применяются в лаборатории генодиагностики «БиоЛинк»

Лаборатория генодиагностики «БиоЛинк» предлагает проведение ряда анализов для выявления наиболее часто встречающихся мутаций, связанных с формированием рака молочной железы/рака яичников.

Срок выполнения — от 7 дней до 1 месяца

Скачать каталог «Молекулярная диагностика в онкологии»

Для получения более подробной информации о возможностях сотрудничества, свяжитесь с нами наиболее удобным для Вас способом тел./факс (383) 334-86-14, e-mail: info@biolinklab.ru или воспользуйтесь контактной формой:

В настоящий момент R&D отделение работает над следующими разработками:

Разработка технологии молекулярно-генетического мониторинга онкологических больных с использованием массового параллельного секвенирования.

Задачи научного исследования: 1. Разработка метода ферментативной пробоподготовки для проведения массового паралелльного секвенирования. 2. Создание равномерно представленной библиотеки ампликонов кодирующей последовательности генов BRCA1/2. 3. Поиск мутаций в генах BRCA1/2 в неселективной выборке из 1000 больных РМЖ Сибирского региона.

ООО «БиоЛинк» при поддержке Фонда Бортника (http://www.fasie.ru/) ( Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере, Фонд содействия инновациям) ведет разработку высокочувствительного теста и набора реагентов для определения мутаций гена EGFR в крови пациентов при раке легкого.

Рак легкого (РЛ) занимает первое место среди онкологических заболеваний по смертности — больше чем суммарная смертность от раков груди, простаты, колоректального рака и меланомы кожи. Примерно 60-70% случаев РЛ диагностируются на стадиях которые неоперабельны и возможны только химиотерапия или лучевая терапия. В 15% случаев РЛ (в том числе в 40% случаев РЛ среди некурящих) выявляют мутации 18-21 экзонов гена EGFR которые обусловливают высокую чувствительность опухоли к терапии таргетными препаратами на основе ингибиторов тирозинкиназной активности EGFR (препараты гефитиниб, эрлотиниб, афатиниб). Для клинической диагностики мутации обычно выявляют в ДНК из фиксированной опухолевой ткани методами на основе секвенирования по Сэнгеру или аллель-специфичной полимеразной цепной реакции. К сожалению, в 40-50% случаев РЛ опухолевая ткань недоступна ввиду неоперабельной стадии и локализации опухоли откуда трудно взять биопсию. При этом с помощью специальных высокочувствительных методов показано, что ДНК опухоли присутствует в крови пациентов, но в очень низкой концентрации. Неинвазивные тесты с использованием крови могут быть уникальной возможностью для пациентов в случае недоступности опухолевой ткани .

Правила забора крови на определение мутаций в генах человека ПЦР диагностику

Кровь на ПЦР диагностику. Забор крови производится натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 2-5 мл и переносится в пробирку с ЭДТА или специальную вакуумную систему типа “Veccuette” (с ЭДТА с сиреневой крышкой), пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом).

Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!

Пробирка с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С — +8°С. Максимальный срок хранения: Кровь, собранная в пробирку с ЭДТА, для определения мутаций в генах BRCA1/2, может храниться при +4°С — +8°С 2 дня.

Правила забора крови на определение ПЦР – исследований инфекций

Для получения плазмы забор крови производят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1, 1 мм) в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки – 6% ЭДТА). Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК/РНК станет невозможным).

Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!

Условия хранения и перевозки материала и предварительно обработанных проб

Образцы цельной крови: -при температуре 20-25ºС – в течение 2 часов; -при температуре 2-8ºС – в течение 6 часов с момента взятия материала для количественного определения нуклеиновых кислот; в течение 12 ч – для качественного определения нуклеиновых кислот;

Недопустимо замораживание образцов цельной крови!

Забор материала на ПЦР ВПЧ инфекций

Для исследования на ВПЧ необходимо достаточное количество эпителиальных клеток, т.к. вирус является внутриклеточным агентом. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде цервикальной слизи и крови. В ряде случаев возможно взятие материала с помощью универсального гинекологического зонда, однако при этом объем соскобного отделяемого будет меньше, а количество клеток может быть недостаточным.

Удаляют слизь и отделяемое влагалища с поверхности шейки матки стерильным марлевым тампоном, вводят рабочую часть цитощетки в цервикальный канал и делают два-три полных оборота по часовой стрелке. Извлекают цитощетку и помещают ее рабочую часть, содержащую взятый материал, в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть цитощетки обламывают не более 1 см пластиковой основы цитощетки и оставляют в пробирке с транспортной средой.

В случае невозможности обломить рабочую часть цитощетки или универсального зонда, следует максимально полно смыть клинический материал с их рабочей части в пробирку с транспортной средой, прижав ее к внутренней стороне пробирки и вращая по 5-10 раз по часовой и против часовой стрелки.

Недопустимо использование многоразовых ножниц для обрезания рабочей части цитощетки или универсального зонда – это может привести к перекрестной контаминации клиническим материалом и, как следствие, получению ложно-положительных результатов.

Пробирки с биологическим материалом до исследования хранят в морозилке при -16°С.

Забор материала на ПЦР диагностику у мужчин

Соскоб (мазок). Забор материала производится универсальным зондом из уретры. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-II). Рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа “Эппендорф” с консервирующим раствором либо тщательно перемешивается вращательным движением, остатки жидкости на зонде отжать о стенки пробирки, зонд извлечь (выбросить в контейнер с дезинфицирующим раствором).

Пробирки с биологическим материалом до исследования хранят в морозилке при -18°С.

Сперма. Собирают в одноразовую сухую пробирку типа «Эппендорф». Максимальный срок хранения 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С — +8°С; при -18°С — -20°С не более 2-х недель.

Сок предстательной железы . После окончания массажа предстательной железы сок в количестве 0,5-1 мл собирают в одноразовую сухую пробирку типа “Эппендорф”. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл.

Максимальный срок хранения 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С — +8°С; при -18°С — -20°С не более 2-х недель.

к Галине Александровне Пауль по тел. +7 (383) 334-86-14.

Правила забора крови на определение мутаций в генах человека ПЦР диагностику

Кровь на ПЦР диагностику. Забор крови производится натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 2-5 мл и переносится в пробирку с ЭДТА или специальную вакуумную систему типа “Veccuette” (с ЭДТА с сиреневой крышкой), пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом).

Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!

Пробирка с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С — +8°С. Максимальный срок хранения: Кровь, собранная в пробирку с ЭДТА, для определения мутаций в генах BRCA1/2, может храниться при +4°С — +8°С 2 дня.

Правила забора крови на определение ПЦР – исследований инфекций

Для получения плазмы забор крови производят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1, 1 мм) в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки – 6% ЭДТА). Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК/РНК станет невозможным).

Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!

Условия хранения и перевозки материала и предварительно обработанных проб

Образцы цельной крови: -при температуре 20-25ºС – в течение 2 часов; -при температуре 2-8ºС – в течение 6 часов с момента взятия материала для количественного определения нуклеиновых кислот; в течение 12 ч – для качественного определения нуклеиновых кислот;

Недопустимо замораживание образцов цельной крови!

Забор материала на ПЦР ВПЧ инфекций

Для исследования на ВПЧ необходимо достаточное количество эпителиальных клеток, т.к. вирус является внутриклеточным агентом. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде цервикальной слизи и крови. В ряде случаев возможно взятие материала с помощью универсального гинекологического зонда, однако при этом объем соскобного отделяемого будет меньше, а количество клеток может быть недостаточным.

Удаляют слизь и отделяемое влагалища с поверхности шейки матки стерильным марлевым тампоном, вводят рабочую часть цитощетки в цервикальный канал и делают два-три полных оборота по часовой стрелке. Извлекают цитощетку и помещают ее рабочую часть, содержащую взятый материал, в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть цитощетки обламывают не более 1 см пластиковой основы цитощетки и оставляют в пробирке с транспортной средой.

В случае невозможности обломить рабочую часть цитощетки или универсального зонда, следует максимально полно смыть клинический материал с их рабочей части в пробирку с транспортной средой, прижав ее к внутренней стороне пробирки и вращая по 5-10 раз по часовой и против часовой стрелки.

Недопустимо использование многоразовых ножниц для обрезания рабочей части цитощетки или универсального зонда – это может привести к перекрестной контаминации клиническим материалом и, как следствие, получению ложно-положительных результатов.

Пробирки с биологическим материалом до исследования хранят в морозилке при -16°С.

Забор материала на ПЦР диагностику у мужчин

Соскоб (мазок). Забор материала производится универсальным зондом из уретры. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-II). Рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа “Эппендорф” с консервирующим раствором либо тщательно перемешивается вращательным движением, остатки жидкости на зонде отжать о стенки пробирки, зонд извлечь (выбросить в контейнер с дезинфицирующим раствором).

Пробирки с биологическим материалом до исследования хранят в морозилке при -18°С.

Сперма. Собирают в одноразовую сухую пробирку типа «Эппендорф». Максимальный срок хранения 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С — +8°С; при -18°С — -20°С не более 2-х недель.

Сок предстательной железы . После окончания массажа предстательной железы сок в количестве 0,5-1 мл собирают в одноразовую сухую пробирку типа “Эппендорф”. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл.

Максимальный срок хранения 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С — +8°С; при -18°С — -20°С не более 2-х недель.

к Галине Александровне Пауль по тел. +7 (383) 334-86-14.

источник

Кровь является важнейшим компонентом, который обеспечивает многие необходимые процессы в организме человека. Как известно, её жидкую часть врачи называют плазмой, а осадочную жидкость, в которой отсутствует фибриноген, сывороткой. Сегодня кровь и все её составные компоненты используются для самых разных целей. Все эти элементы, как и саму кровь, необходимо определённым образом хранить при заданной температуре, в противном случае они теряют свои основные свойства и становятся непригодными для дальнейшего использования, например, для переливания.

Понятно, что кровь ни в коем случае нельзя хранить в домашних условиях, так как дома невозможно создать оптимальные показатели, при которых она не испортится. Те лаборатории, которые имеют законное право хранить кровь и работать с ней, используют специальное оборудование, которое регулярно стерилизуется, чтобы избежать попадания в неё всевозможной инфекции и грязи.

Для хранения крови и её составных компонентов используют специальные холодильники. Они должны быть в обязательном порядке оснащены несколькими различными системами мониторинга. Это необходимо для того, чтобы обеспечить оптимальный температурный режим. Как правило, в холодильнике внутренняя температура проверяется и регистрируется один раз в четыре часа. В случае если температурные показатели начинают приближаться к своим аварийным границам, раздается сигнал для медперсонала.

В том случае, когда устройство, в котором находится кровь, по каким-либо причинам выходит из строя, все компоненты незамедлительно перемещаются в другое хранилище. На это отводится определённое время, которое не должно превышать одного часа. В лабораториях весь контакт персонала с кровью и её компонентами сводится к минимуму. Это минимизирует возможность попадания в жидкость различных вирусов и загрязнителей.

При необходимости изъятия из морозильной установки крови работы с ней ведутся при комнатной температуре в течение тридцати минут, в противном случае кровяные тельца начинают терять свои первоначальные свойства. При хранении крови и её компонентов обязательно контролируют необходимую циркуляцию воздуха, а также обеспечивают условия, которые сводят к минимуму их свёртываемость.

Категорически запрещается хранить в одном месте карантинную кровь и другие образцы. Кроме этого, упаковки с тромбоцитами хранят рядом, а не друг на друге. Консервирование крови производится либо в жидком состоянии, при этом окружающая температура может быть, как выше, так и ниже нуля, либо в замороженном. В этом случае температуру опускают до ультранизких значений, что даёт возможность обеспечить её многолетнее хранение.

Во время консервации крови и её компонентов обязательно обеспечивается апирогенность (иначе говоря, стерильность). Также не допускается наличие в жидкости всевозможных сгустков. Мешки из пластика, которые используют для хранения крови, герметизируют путём запаивания на аппарате «Гематрон» либо особым образом завязывают. Все мешки укладывают в коробки из картона и помещают в изотермические контейнеры.

Все компоненты крови, которые помещаются на хранение в лабораторию, обязательно нумеруются, при этом делается соответствующая запись в специальном журнале. Также в течение суток ведётся журнал, в котором регулярно делаются отметки о температурных условиях и состоянии используемого оборудования.

Срок хранения цельной крови при стандартной комнатной температуре составляет 24 часа. Тромбоциты в этих условиях можно хранить до пяти суток, однако их необходимо непрерывно перемешивать. В свою очередь эритроциты следует хранить при температурных показателях от двух до шести градусов по Цельсию в течение 42 дней. Педиатрические выщелоченные эритроциты хранят до 35 суток, а лейкофильтрованные в течение первых 28 дней. Плазма сохраняет все свои свойства в течение одного года, если хранится при температуре от 25 градусов ниже нуля.

Первые лаборатории, в которых можно было длительно хранить кровь, появились в период Второй мировой войны. Идея принадлежала американцу Чарльзу Дрю.

Кровь за счёт использования специальных стабилизаторов могут лишить способности свертываться. Такая кровь называется стабилизированной, а срок её хранения составляет 24 часа. Добавление в кровяную жидкость электролитов, а также сахарозы и глюкозы позволяет увеличить её срок хранения до 25 дней. В сложных экстренных случаях, когда нет возможности достать консервированную кровь, может быть использована свежецитратная кровь, которую необходимо влить больному в течение первых двух часов после её взятия.

В том случае, когда предполагается хранение крови в течение десяти лет и выше, для того чтобы сохранить неповреждёнными её эритроциты, используют либо быстрое охлаждение до температуры 196 градусов по Цельсию ниже нуля и последующее её хранение в жидком азоте, либо медленное. В этом случае процесс замерзания происходит в течение нескольких часов при температурах до ста градусов Цельсия ниже нуля и с использованием определённых групп криозащитных веществ.

Перед тем как использовать кровь и её составные компоненты, которые находились на хранении, их тщательно проверяют лабораторным методом. В случае выявления различных сгустков, изменения цветности, а также несоответствие кровяной жидкости нормальным показателям, её не допускают к использованию и списывают установленным образом.

источник

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Технологии лабораторные клинические

ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Правила ведения преаналитического этапа

Clinical laboratory technologies. Quality assurance of clinical laboratory tests. Part 4. Rules for conducting of preanalytical stage

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Лабораторией проблем клинико-лабораторной диагностики Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова Росздрава, кафедрой биохимии Российской медицинской академии последипломного образования Росздрава

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 466 «Медицинские технологии»

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Настоящий стандарт устанавливает требования к условиям и процедурам ведения преаналитического этапа клинических лабораторных исследований с целью исключения или ограничения влияния эндогенных, экзогенных, ятрогенных и иных факторов, мешающих правильному отражению состояния внутренней среды обследуемых пациентов в результатах клинических лабораторных исследований.

Настоящий стандарт может использоваться всеми организациями, учреждениями и предприятиями, а также индивидуальными предпринимателями, деятельность которых связана с оказанием медицинской помощи.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие национальные стандарты:

ГОСТ Р ИСО 15189-2006 Лаборатории медицинские. Специальные требования к качеству и компетентности

ГОСТ Р ИСО 15190-2007* Лаборатории медицинские. Требования к безопасности
_______________
* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) Лаборатории медицинские. Требования к безопасности, здесь и далее по тексту. — Примечание изготовителя базы данных.

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

Достоверность отражения в результатах лабораторных исследований состояния внутренней среды пациента, содержания искомых компонентов биологических материалов в значительной степени зависит от условий, в которых пациент находился в период, предшествовавший взятию у него образца биоматериала, от условий и процедур взятия образца, его первичной обработки и транспортирования в лабораторию, то есть от факторов преаналитического этапа клинического лабораторного исследования.

С целью исключения или ограничения влияния внелабораторных факторов преаналитического этапа на результаты лабораторных исследований настоящий стандарт регламентирует:

а) условия периода, предшествующего взятию у пациента образца биологического материала (приложение А);

б) условия и процедуры взятия образца биологического материала у пациента;

в) процедуры первичной обработки образца биологического материала;

г) условия хранения и транспортирования образцов биоматериалов в клинико-диагностические лаборатории.

Требования стандарта основаны на:

а) научных данных о постоянных и переменных факторах физического, химического и биологического характера, способных оказать влияние на содержание веществ и клеток в биологических материалах пациентов;

б) обобщенных данных о стабильности компонентов в образцах биологических материалов после их взятия при различных условиях хранения (приложения Б, В, Г);

в) обобщенных данных о влиянии принимаемых пациентом лекарственных средств на результаты лабораторных исследований (приложение Д);

г) требованиях ГОСТ Р ИСО 15189 (раздел 5.4).

Правила предназначены для обеспечения такого качества ведения преаналитического этапа клинических лабораторных исследований, которое необходимо для получения их результатов, достоверно отражающих состояние внутренней среды обследуемых пациентов в момент обследования, путем:

— правильной подготовки пациентов к проведению лабораторных тестов;

— информирования пациентов о требуемых ограничениях в диете, физической активности, курении, о правилах сбора биологических материалов, которые обычно собирает сам пациент (моча, кал);

— инструктирования персонала, участвующего во взятии образцов биологических материалов у пациентов, об особенностях процедур взятия различных видов этих материалов;

— рациональной организации процесса взятия образцов биоматериалов;

— полноценного обеспечения процедур взятия образцов биоматериалов необходимыми инструментами, посудой, средствами первичной обработки и транспортировки.

Принимая во внимание потенциальную биоопасность образцов биологического материала, получаемого от пациентов, персонал, выполняющий эти функции, должен быть информирован и обучен правилам безопасного взятия образцов и должен располагать средствами защиты (перчатки, устройства для безопасного сбора использованных игл и т.п.) в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 15190.

Настоящие правила содержат общие положения, которые по отношению к отдельным биологическим материалам и отдельным изучаемым в них аналитам, биологическим объектам могут требовать особых условий и процедур, что должно быть отражено в нормативных документах по технологиям оказания соответствующих простых или комплексных медицинских услуг, применительно к функциям различных категорий клинического персонала.

На основании этих общих правил в каждой медицинской организации следует разрабатывать и вводить для обязательного исполнения внутренние правила ведения преаналитического этапа применительно к каждому виду исследований, выполняемых в лаборатории, учитывающие особенности медицинского профиля и организационной формы учреждения. В случае выполнения исследований в лаборатории другого учреждения правила ведения преаналитического этапа, включая условия транспортирования образцов, применительно к этим исследованиям следует согласовывать с руководителем лаборатории, выполняющей эти исследования. Наличие и исполнение персоналом правил ведения преаналитического этапа лабораторных исследований является одним из обязательных условий при сертификации процессов выполнения исследований в клинико-диагностической лаборатории.

Взятие образца или пробы — это процесс изъятия или образования проб, охарактеризованный процедурой их взятия, то есть оперативными требованиями и/или инструкциями для отбора, изъятия и подготовки одной или нескольких проб из инспектируемого лота для выяснения характеристик этого лота (в лабораторной медицине инспектируемый лот — это обследуемый пациент, а образцы или пробы — это порции того или иного биологического материала).

3.2.1 Биологический материал — кровь

Большая часть клинических лабораторных исследований проводится в образцах крови: венозной, артериальной или капиллярной. Венозная кровь — лучший материал для определения гематологических, биохимических, гормональных, серологических и иммунологических показателей.

Для исследования аналитов в цельной крови, сыворотке или плазме образец крови берут чаще всего из локтевой вены. Показания для взятия крови из пальца на клиническое исследование крови:

— при ожогах, занимающих большую площадь поверхности тела пациента;

— при наличии у пациента очень мелких вен или когда они труднодоступны;

— при выраженном ожирении пациента;

— при установленной склонности к венозному тромбозу;

— у новорожденных.

При взятии образца крови из венозного или артериального катетера, через который проводилось вливание инфузионного раствора, катетер следует предварительно промыть изотоническим солевым раствором в объеме, соответствующем объему катетера, и отбросить первые 5 мл (миллилитров) взятой из катетера крови. Недостаточное промывание катетера может привести к загрязнению образца крови препаратами, вводившимися через катетер. Из катетеров, обработанных гепарином, нельзя брать образцы крови для исследований системы свертывания крови.

В зависимости от назначенного вида исследования образец крови должен собираться при наличии строго определенных добавок [1]. Для получения плазмы кровь собирают с добавлением антикоагулянтов: этилендиаминтетрауксусной кислоты, цитрата, оксалата, гепарина [2]. Для исследований системы свертывания крови применяется только цитратная плазма (в точном соотношении одной части 3,8%-ного (0,129 моль/л) раствора цитрата натрия и девяти частей крови). В большинстве гематологических исследований используют венозную кровь с солями этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, К или К -ЭДТА). Для получения сыворотки кровь собирают без антикоагулянтов. Для исследования глюкозы кровь собирают с добавлением ингибиторов гликолиза (фтористого натрия или йодоацетата).

Для исследования ряда нестабильных гормонов (остеокальцина, кальцитонина, адренокортикотропного гормона) используют ингибитор апротинин.

Для получения из образцов крови вариантов проб для различных видов исследований рекомендуется следующая последовательность наполнения пробирок:

— кровь без добавок — для получения гемокультуры, используемой в микробиологических исследованиях;

— кровь без антикоагулянтов — для получения сыворотки, используемой при клинико-химических и серологических исследованиях;

— кровь с цитратом — для получения плазмы, используемой при коагулологических исследованиях;

— кровь с гепарином — для получения плазмы, используемой при биохимических исследованиях;

— кровь с ЭДТА — для получения цельной крови, используемой для гематологических исследований, и плазмы, используемой для некоторых клинико-химических исследований.

С целью сохранения в образце крови эритроцитов применяют смесь антикоагулянтов с добавками, например, АЦД (антикоагулянт — цитрат-декстроза или кислота-цитрат-декстроза).

Во избежание ятрогенной анемизации пациентов объем забираемой для исследований крови должен быть рационально рассчитан, исходя из того, что в конечном итоге непосредственно для анализа расходуется лишь половина от первоначально взятого объема (с учетом использования сыворотки или плазмы при гематокрите 0,5).

При использовании современных анализаторов достаточны следующие объемы образцов:

— для биохимических исследований: 4-5 мл; при использовании гепаринизированной плазмы: 3-4 мл;

— для гематологических исследований: 2-3 мл крови с ЭДТА;

— для исследований свертывающей системы: 2-3 мл цитратной крови;

— для иммуноисследований, включая исследования белков и др.: 1 мл цельной крови для 3-4 иммуноанализов;

— для исследования скорости оседания эритроцитов: 2-3 мл цитратной крови;

— для исследования газов крови: капиллярная кровь — 50 мкл (микролитров); артериальная или венозная кровь с гепарином — 1 мл.

Рационально применение пробирок для взятия крови небольшого объема (4-5 мл) при соотношении диаметра и высоты пробирки 13 на 75 мм. Использование плазмы вместо сыворотки дает увеличение на 15%-20% выхода анализируемого материала при одном и том же объеме взятой у пациента крови. Взятие венозной крови облегчается применением вакуумных пробирок. Под влиянием вакуума кровь из вены быстро поступает в пробирку, что упрощает процедуру взятия и сокращает время наложения жгута.

Для обозначения содержимого пробирок с различными добавочными компонентами применяют цветное кодирование закрывающих их пробок. Так, для пробирок с антикоагулянтами лиловый цвет пробки означает наличие ЭДТА, зеленый цвет — гепарина, голубой — цитрата. Добавление в пробирку ингибиторов гликолиза (фторида, йодацетата) как одних, так и в комбинации с антикоагулянтами (гепарином, ЭДТА), кодируется пробкой серого цвета (см. таблицу 1).

Таблица 1 — Добавки в пробирках с цветным кодом

Пустая, без добавок, для сыворотки

Гематология и отдельные химические анализы в плазме

Цитрат натрия (0,105-0,129 моль/л)

Фторид натрия (2-4 мг/мл)/оксалат калия (1-3 мг/мл)

Примечание — Пробирки, содержащие кислоту-цитрат-декстрозу (АЦД, формула А и В) используют для сохранения клеток и кодируют желтым цветом.

3.2.2 Биологический материал — спинномозговая жидкость

Взятие образца спинномозговой жидкости производят в строгом соответствии с утвержденной в установленном порядке процедурой и по возможности вскоре после взятия крови для исследований в сыворотке, с результатами которых данные в спинномозговой жидкости сопоставляют.

Первые 0,5 мл и всю спинномозговую жидкость (далее — СМЖ) с примесью крови следует удалить. Рекомендуемые объемы проб СМЖ — в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2 — Рекомендуемые объемы проб СМЖ

Супернатант, используемый для клинической химии

Пробу помещают с соблюдением правил асептики в пробирки с пробками (для микробиологических исследований — в стерильные, для цитологических и клинико-химических исследований — в свободные от частиц пыли, без ЭДТА и фторида).

3.2.3 Биологический материал — моча

В зависимости от цели исследования образцы мочи собирают либо в виде отдельных порций, либо за определенный промежуток времени. Первая утренняя порция мочи (натощак, сразу после сна) используется для общего анализа, вторая утренняя порция мочи — для количественных исследований в соотношении с выделением креатинина и для бактериологического исследования, случайная порция — для качественных или количественных клинико-химических исследований, суточная моча — для количественного определения экскреции аналитов.

Желательно использовать сосуд с широкой горловиной и крышкой, по возможности надо собирать мочу сразу в посуду, в которой она будет доставлена в лабораторию. Мочу из судна, утки, горшка брать нельзя, так как даже после прополаскивания этих сосудов может сохраняться осадок фосфатов, способствующих разложению свежей мочи. Если в лабораторию доставляется не вся собранная моча, то перед сливанием ее части необходимо тщательное взбалтывание, чтобы осадок, содержащий форменные элементы и кристаллы, не был утрачен.

При взятии утренней мочи (например, для общего анализа) собирают всю порцию утренней мочи (желательно, чтобы предыдущее мочеиспускание было не позже, чем в два часа ночи) в сухую, чистую, но не стерильную посуду, при свободном мочеиспускании. При сборе суточной мочи пациент собирает ее в течение 24 ч на обычном питьевом режиме [1,5-2 л (литра) в сутки]. Утром в 6-8 ч он освобождает мочевой пузырь (эту порцию мочи выливают), а затем в течение суток собирает всю мочу в чистый сосуд с широкой горловиной и плотно закрывающейся крышкой, емкостью не менее 2 л. Последняя порция берется точно в то же время, когда накануне был начат сбор (время начала и конца сбора отмечают). Если не вся моча направляется в лабораторию, то количество суточной мочи измеряют мерным цилиндром, отливают часть в чистый сосуд, в котором ее доставляют в лабораторию, и обязательно указывают объем суточной мочи.

Если для анализа требуется собрать мочу за 10-12 ч, сбор обычно проводят в ночное время: перед сном больной опорожняет мочевой пузырь и отмечает время (эту порцию мочи отбрасывают), затем больной мочится через 10-12 ч в приготовленную посуду, эту порцию мочи доставляют для исследований в лабораторию. При невозможности удержать мочеиспускание 10-12 ч, больной мочится в приготовленную посуду в несколько приемов и отмечает время последнего мочеиспускания.

При необходимости сбора мочи за два или три часа, больной опорожняет мочевой пузырь (эта порция отбрасывается), отмечает время и ровно через 2 или 3 часа собирает мочу для исследования.

При проведении пробы трех сосудов (стаканов) собирают утреннюю порцию мочи следующим образом: утром натощак после пробуждения и тщательного туалета наружных половых органов больной начинает мочиться в первый сосуд, продолжает во второй и заканчивает — в третий. Преобладающей по объему должна быть вторая порция. При диагностике урологических заболеваний у женщин чаще используют пробу двух сосудов, то есть делят при мочеиспускании мочу на две части, важно, чтобы первая часть в этом случае была небольшой по объему. При проведении пробы трех сосудов у мужчин последнюю третью порцию мочи собирают после массажа предстательной железы. Все сосуды готовят предварительно, на каждом обязательно указывают номер порции.

В первую порцию собираемой за сутки мочи в зависимости от назначенного вида исследования добавляют различные консерванты: для большинства компонентов — тимол (несколько кристаллов тимола на 100 мл мочи), для глюкозы, мочевины, мочевой кислоты, калия, кальция, оксалата, цитрата — азид натрия (0,5 или 1,0 г) на все количество суточной мочи, для катехоламинов и их метаболитов, 5-гидрокси-уксусной кислоты, кальция, магния, фосфатов — соляная кислота (25 мл, что соответствует 6 моль/л на объем суточной мочи), для порфиринов, уробилиногена — карбонат натрия, 2 г на литр мочи. Возможно также применение жидкости Мюллера (10 г сульфата натрия, 25 г бихромата калия, 100 мл воды) по 5 мл на 100 мл мочи, борной кислоты по 3-4 гранулы на 100 мл мочи, ледяной уксусной кислоты по 5 мл на все количество суточной мочи, бензоата или фторида натрия по 5 г на все количество суточной мочи. Несколько миллилитров толуола добавляют в сосуд с мочой так, чтобы он тонким слоем покрывал всю поверхность мочи; это дает хороший бактериостатический эффект и не мешает химическим анализам, но вызывает легкую мутность. Формалин, добавленный из расчета приблизительно 3-4 капли на 100 мл мочи, задерживает рост бактерий, хорошо сохраняет клеточные элементы, но мешает при некоторых химических определениях (сахар, индикан). Хлороформ, добавляемый из расчета 2-3 мл хлороформной воды (5 мл хлороформа на 1 л воды) на 100 мл мочи, проявляет недостаточный эффект консервирования, а также неблагоприятно влияет на результаты исследования осадка мочи (изменение клеток) и результаты некоторых химических исследований.

3.2.4 Биологический материал — слюна

Слюну, представляющую собой либо продукт только одной железы, либо смесь секретов нескольких желез, допускается использовать для исследования ряда гормонов и лекарственных веществ, в том числе для лекарственного мониторинга. Сбор слюны может осуществляться с помощью устройств (тампонов, шариков), состоящих из различных абсорбирующих материалов (хлопка, вискозы, полимеров).

3.2.5 Биологический материал — кал

Кал для исследования должен быть собран в чистую сухую посуду с широкой горловиной, желательно стеклянную (не следует собирать кал в баночки и флаконы с узким горлом, а также в коробочки, спичечные коробки, бумагу и т.д.). Следует избегать примеси к испражнениям мочи, выделений из половых органов и других веществ, в том числе лекарств. Если для какого-либо химического определения (например, уробилиногена) нужно точно знать количество выделенного кала, то посуду, в которую собирают испражнения, нужно предварительно взвесить.

При взятии образцов для бактериологических исследований особенное внимание должно быть уделено предотвращению загрязнения. Содержимое абсцесса следует набирать через кожу, если это возможно, поскольку ее легче дезинфицировать, чем слизистые оболочки. Жидкий материал предпочтительнее образцов на тампонах. Секрет, содержащий интерферирующие вторичные микроорганизмы, должен быть удален с поверхности открытой раны, затем образец собирают бактериологическим тампоном круговыми вращательными движениями от центра к периферии раны. Объем пробы должен быть насколько возможно большим. Образцы для культуры крови, если возможно, следует собирать в период повышения температуры тела. При подозрении на инфекционный эндокардит следует брать не менее десяти культур крови.

Образцы для выделения и идентификации вирусов обычно собирают немедленно после появления симптомов (если возможно — в первые три дня). Для анализа используют образцы на тампонах (из носа, гортани, глаз), смывы из глотки, жидкость из пузырьков при кожных поражениях, кал, мочу и спинномозговую жидкость.

При взятии кожных образцов для микологических исследований соскобы с зон активного поражения берут с помощью скальпеля после тщательной дезинфекции участка кожи. При отложениях на волосах их образцы берут с помощью эпиляционной пипетки или остригают. При поражении ногтей берут их срезы и соскобы с нижней части ногтей. Для обнаружения дрожжей в моче используют случайный образец мочи, для детекции дрожжей или грибков в мокроте предпочтительнее использовать ее утренний образец.

При диагностике паразитарных заболеваний исследуют кровь (для обнаружения плазмодиев, трипаносомы, лейшмании, микрофилярии), кал (для обнаружения лямблии, гельминтов), образцы тканей пораженных органов (для обнаружения Trichinella spiralis larvae, Echinococcus) или самих паразитов (артроподы: клещи, насекомые), мочу (при мочеполовом шистозомозе). ПЦР-анализ может быть проведен в образцах: крови с ЭДТУК и цитратом, высушенной крови (на фильтровальной бумаге), костного мозга, мокроты, жидкости из полости рта, бронхиальной лаважной жидкости, спинномозговой жидкости, мочи, кала, биопсийного материала, культуре клеток, фиксированной или покрытой (парафинированной) ткани и т.д. Важным условием получения достоверных результатов является предотвращение загрязнения образцов экзогенной дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК), обычными источниками которой являются волосы и кожа людей, дверные ручки, лабораторная мебель, порошки, реагенты, термоциклер и наконечники пипеток. Идеальным средством создания чистой беспылевой среды служат настольные шкафы с ламинарным потоком профильтрованного воздуха. Взятие образцов для молекулярно-биологических исследований лучше всего проводить в закрытые одноразовые системы, которые должны быть свободны от нуклеаз, для чего подвергаются автоклавированию в токе горячего воздуха. При использовании незакрытых систем для взятия проб следует, по меньшей мере, надевать одноразовые перчатки. Стеклянная посуда должна обрабатываться 1%-ным раствором диэтилпирокарбоната, который тормозит РНКазы. Оставшийся препарат следует тщательно удалить путем автоклавировения посуды и последующей ее обработки жаром при температуре 250 °С в течение 4 ч.

3.4.1 Правила оформления направления на лабораторные исследования

Заявки на анализы должны быть согласованы со всеми врачами-специалистами, участвующими в лечении больного, чтобы при венепункции взять материал для всех необходимых исследований и не повторять процедуру. Медицинская сестра должна собрать все заявки данного пациента и дать суммарную заявку на анализы (применительно только к стационару). Если пациент будет переведен в другое отделение, то она также должна предупредить лабораторию об этом, чтобы результаты исследований были направлены в нужное отделение и не утеряны.

В направлении на лабораторные исследования (заявке) должны быть отображены следующие данные:

— дата и время назначения;

— дата и время взятия крови (сбора биологического материала);

— фамилия и инициалы пациента;

— отделение, номер истории болезни, номер палаты;

— возраст, пол;

— диагноз;

— время приема последней дозы препаратов, способных повлиять на результата анализа;

— фамилия и инициалы лечащего врача, назначившего исследование;

— перечень необходимых исследований;

— подпись специалиста, проводившего взятие крови или другого биологического материала.

3.4.2 Правила первичной обработки образца биоматериала

Важнейшей процедурой первичной обработки образцов биоматериалов после взятия их у пациентов является их кодирование с целью последующей надежной их идентификации. Кодирование видов образцов по характеру внесенных в них добавок закреплено с помощью разного цвета крышек пробирок, содержащих соответствующие добавки: красный/белый — без добавок, для сыворотки, клинико-химические исследования, серология; зеленый — гепарин, для плазмы, клинико-химические исследования; фиолетовый — ЭДТА, для плазмы, гематологические исследования; голубой — цитрат натрия, для коагулологических исследований; серый — фторид натрия, для исследования глюкозы, лактата. Идентификация образцов от определенных пациентов наиболее рациональна с помощью штрих-кодов, в которых отражены идентификационные признаки пациентов: фамилия, клиническое отделение, фамилия лечащего врача и т.п. Штрих-коды изготавливают в месте взятия образца (при доставке проб из другой лаборатории маркировку допускается проводить в лаборатории, выполняющей анализ) и считывают с помощью специального устройства в клинической лаборатории. В небольших учреждениях возможно ручное кодирование пробирок нанесением на них карандашом по стеклу или фломастером условных знаков, цифр.

Другие процедуры первичной обработки образцов биоматериалов по месту их взятия зависят от общей организации лабораторного обеспечения в данном учреждении. Если процедурные кабинеты расположены в том же здании, что и лаборатория, то контейнеры с образцами следует как можно скорее доставлять в лабораторию, где и будут осуществляться все дальнейшие действия.

Пробы, содержащие инфекционные агенты, следует обрабатывать иначе, чем пробы с относительно небольшим риском инфицирования (подобно большинству проб крови, сыворотки, мочи, кала, тампонам, мазкам и фильтровальным бумажкам).

3.4.2.1 Биологический материал — кровь

При необходимости более длительного транспортирования в лабораторию образцы свернувшейся крови (обычно свертывание происходит в течение 30 мин), предназначенные для получения сыворотки, должны быть отцентрифугированы на месте не позднее, чем через 1 ч после взятия образца. Кровь для получения сыворотки или плазмы центрифугируют в течение 10-15 мин при ускорении 1000-1200 g (оборотов в минуту). Цитратную плазму для исследований системы свертывания крови центрифугируют в течение 15 мин при 2000 g; для получения плазмы, свободной от тромбоцитов, центрифугирование длится 15-30 мин при 2000-3000 g. Центрифугирование пробирок с капиллярной кровью выполняется при 6000-15000 g в течение 90 с. Обычно центрифугирование проводят при температуре 20 °С — 22 °С. Для отдельных аналитов может требоваться центрифугирование при температуре 4 °С, 6 °С. Мазки крови для дифференциального подсчета лейкоцитов должны быть подготовлены не позднее, чем через 3 ч после взятия образца.

Поскольку нуклеиновые кислоты быстро распадаются, образцы для молекулярно-биологических исследований следует быстро подвергать стабилизации путем инактивации ДНКаз и РНКаз с помощью хаотропных веществ (гуанидин-изотиоцианат — ГИТЦ) и органического растворителя, например, фенола. Конечная концентрация ГИТЦ в стабилизированной пробе должна быть не ниже чем 4 моль/л. Стабилизированный таким способом материал не должен охлаждаться во избежание кристаллизации ГИТЦ. Кровь с ЭДТА для экстракции ДНК из лейкоцитов не требует стабилизации.

3.4.2.2 Биологический материал — кал

Вегетативные формы паразитов можно обнаружить только в свежих образцах кала в течение 40 мин после испражнения при условии его хранения при температуре 4 °С. Цисты стабильны. Для концентрации паразитов и их сохранения в образцах кала обычно применяют растворы мертиолят-йод-формалин и ацетат натрия-формалин.

3.5 Требования к условиям хранения и транспортирования образцов биоматериалов в клиническую лабораторию

Условия хранения образцов биоматериалов, взятых у пациентов, определяются стабильностью в этих условиях искомых аналитов. Максимально допускаемая нестабильность, выраженная в процентном отклонении результата после хранения от исходного уровня, не должна превышать половины размера общей ошибки определения, рассчитываемой из суммы биологической и аналитической вариации данного аналита. Максимально допускаемое время хранения измеряется периодом времени, в течение которого в 95% образцов содержание аналита сохраняется на исходном уровне.

Стабильность аналитов в различных видах образцов (крови, мочи, спинномозговой жидкости) и проб (сыворотке, плазме, осадке, мазке крови) неодинакова [2] (см. приложения Б, В, Г). Данные о стабильности проб следует учитывать и при их хранении после поступления в лабораторию. В отношении аналитов, нестабильных на свету, должны быть соблюдены соответствующие предосторожности (сбор материала в темную посуду, защита образца от прямого света).

3.5.1 Биологический материал — кровь

Содержание электролитов, субстратов, некоторых ферментов может не изменяться при хранении образцов сыворотки крови при температуре холодильника 4 °С в течение до четырех дней. Гемоглобин, эритроциты стабильны в течение одного дня при хранении в закрытой пробирке. Хранение образцов плазмы крови, предназначенной для исследований свертывающей системы, в условиях комнатной температуры более 4 ч не рекомендуется.

Исследование газов крови следует проводить немедленно; при невозможности неотложного исследования — образцы в закрытых стеклянных контейнерах могут храниться в бане с ледяной водой до 2 ч.

При транспортировании в лабораторию контейнеры с образцами крови следует предохранять от тряски во избежание развития гемолиза. Температура ниже 4 °С и выше 30 °С может существенно изменить содержание в образце многих аналитов. Образцы цельной крови пересылке не подлежат.

3.5.2 Биологический материал — моча

Собранную мочу как можно быстрее доставляют в лабораторию. Длительное хранение мочи при комнатной температуре приводит к изменению физических свойств, разрушению клеток и размножению бактерий. Моча, собранная для общего анализа, может храниться не более 1,5-2,0 ч обязательно в холодильнике, применение консервантов нежелательно, но допускается, если между мочеиспусканием и исследованием проходит более 2 ч. Наиболее приемлемый способ сохранения мочи — охлаждение (можно хранить в холодильнике, но не замораживать). При охлаждении не разрушаются форменные элементы, но возможно влияние на результаты определения относительной плотности.

3.5.3 Биологический материал — спинномозговая жидкость

При исследовании в пределах 1 ч пробу не охлаждают. Для транспортирования проб СМЖ используют закрытые пробирки. При исследовании в пределах трех часов — хранить на льду, не замораживать, не фиксировать, не добавлять консерванты. Транспортирование следует осуществлять как можно скорее в связи с нестабильностью клеток. Для цитологических исследований следует отсылать препараты, полученные путем цитоцентрифугирования пробы СМЖ (20 мин при 180 g), которые стабильны в течение 4-6 дней при комнатной температуре. Для длительного хранения после отделения клеток с помощью центрифугирования пробу следует быстро заморозить до минус 70 °С в тщательно закупоренном полипропиленовом сосуде.

3.5.4 Доставка в лабораторию биоматериалов для микробиологического исследования

Доставка в лабораторию любого образца биоматериала, предназначаемого для микробиологического исследования, должна длиться не более двух часов после взятия материала. Даже наиболее совершенная транспортная система не может служить заменой быстрому транспортированию и немедленному исследованию образца. Требования к транспортированию и хранению бактериологических проб приведены в таблице 3. Если соблюдение этих условий не может быть обеспечено, рекомендуется инокуляция во флакон для культур крови или в гемофлакон или, например, для проб мочи, использование погружных слайдов.

Таблица 3 — Условия транспортирования и хранения образцов различных биоматериалов для бактериологических исследований

источник